棘阿米巴原虫全长cDNA文库的构建

发布时间：2017-10-19 17:49

  本文关键词：棘阿米巴原虫全长cDNA文库的构建

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【摘要】：目的快速构建棘阿米巴滋养体全长cDNA文库,为棘阿米巴滋养体抗原的筛选和基因结构研究奠定基础。方法以棘阿米巴滋养体分离株总RNA为模板,以经修饰的SMART寡聚核苷酸引物逆转录合成单链cDNA,采用长距PCR(long-Distance PCR,LD PCR)方法扩增得到双链cDNA,经蛋白酶K消化和SfiⅠ酶切后通过色谱柱CHROMA SPON-400按分子质量进行分离,进行1%琼脂糖凝胶电泳鉴定,回收纯化0.4~2.5kb分离产物。取1μl PCR产物与λ噬菌体连接,以XL1-BLUE为受体菌扩增得到cDNA文库,分别用梯度法和随机测序法检测文库滴度与重组率。结果成功构建棘阿米巴cDNA文库,文库滴度为3.85×107pfu/ml,插入片段大小在0.4~2.5kb之间,重组率为100%(20/20)。结论棘阿米巴滋养cDNA文库构建成功,为棘阿米巴滋养体抗原的筛选和基因结构研究奠定了基础。
【作者单位】： 吉林医药学院病原学教研室;
【关键词】： 棘阿米巴 cDNA文库 RNA稳定剂
【基金】：国家自然科学基金课题(No.81301450) 吉林省教育厅课题(吉教科合字No.2014373) 吉林省科技厅国际合作项目(No.20130413035GH)
【分类号】：R382.1
【正文快照】： 棘阿米巴原虫(Acanthamoeba spp.)是广泛分布于自然环境中的自由生活阿米巴,其中致病性棘阿米巴主要引起致盲性的棘阿米巴性角膜炎(Acanthamoebakeratitis,AK)和阿米巴性肉芽肿性脑炎或脑膜脑炎(granμlomatous amoebic encephalitis,GAE),尤其在免疫功能低下人群,其感染率逐

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1 钱e

本文编号：1062479