SASR-CoV核衣壳蛋白在杆状病毒-昆虫系统的克隆表达及抗原性分析

发布时间：2017-10-19 23:31

  本文关键词：SASR-CoV核衣壳蛋白在杆状病毒-昆虫系统的克隆表达及抗原性分析

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【摘要】：目的:SARS冠状病毒(SARS-CoV)核衣壳蛋白(N蛋白)在杆状病毒-昆虫系统的表达,研究其抗原性。方法:利用PCR方法扩增SARS-NP全长基因,使用BamHⅠ和SalⅠ限制性内切酶定向插入Bac-to-Bac系统的pFastBac HTC载体,构建重组质粒转化DH10Bac细胞,获得重组杆粒DNA后转染Sf9细胞,在High Five细胞中表达SARS-NP;表达产物经NiNTA亲和层析纯化及免疫印迹和ELISA方法验证抗原性。结果:成功构建pFastBac HTC-SARS-NP重组质粒,并在High Five细胞高效表达,获得相对分子量约48 kD的重组蛋白质。经验证,重组蛋白能被SARS-CoV NP的特异性单抗(8E1A17)和兔免疫血清识别,能与SARS患者血清反应,与健康人血清、人冠状病毒229E型和OC43型的杂交瘤培养上清、相对应的兔免疫血清、患者血清均无交叉反应,具良好抗原反应性。结论:SARS-NP成功表达于杆状病毒-昆虫系统,具较强抗原反应性,初步认为其与229E型和OC43型感染血清无交叉反应性。
【作者单位】： 南方医科大学珠江医院检验医学部;
【关键词】： 严重急性呼吸综合征(SARS) SARS冠状病毒(SARS-CoV) 核衣壳蛋白 杆状病毒 抗原反应性
【基金】：国家重大科技专项课题(2012ZX10004-213) 广东省高等学校珠江学者岗位计划资助项目(2009GDUPS)
【分类号】：R373
【正文快照】： 冠状病毒是引起人类呼吸道感染的常见病原之一。2012年发生的中东呼吸综合征(MERS-CoV引起)和2003年爆发的严重急性呼吸综合征(SARS-CoV引起)病原体均为新型的冠状病毒,引起全球广泛关注[1,2]。前期研究证实SARS-CoV的核衣壳蛋白(N)可诱导产生强烈的体液和细胞免疫,是主要的抗

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本文编号：1063985