人与鼠源内皮抑制素不同标签重组蛋白的表达纯化及活性分析

发布时间：2017-10-23 19:02

  本文关键词：人与鼠源内皮抑制素不同标签重组蛋白的表达纯化及活性分析

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【摘要】：根据文献报道和NCBI数据库确定人源内皮抑制素(HE)和鼠源内皮抑制素(ME)DNA序列,以DNA合成法分别获得长度为554 bp的人源内和长度为565 bp的鼠源内皮抑素基因;分别构建携带谷胱甘肽巯基转移酶(GST)表达标签的原核表达质粒pGEX-4T1-HE和携带硫氧还蛋白A(TrxA)表达标签的原核表达质粒pET-32a-ME,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,获得不同表达标签的HE、ME重组蛋白.最后通过鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)试验验证重组蛋白的抗血管生成活性.结果表明,构建了人与鼠源内皮抑制素基因不同标签表达载体,在大肠杆菌中成功诱导表达.获得具有活性的人与鼠源ES重组蛋白.纯化复性后的重组蛋白能明显抑制新生血管的生长.GST和TrxA标签对增进重组ES可溶表达没有显著差异,两组标签的重组蛋白都主要存在于包涵体内.
【作者单位】： 广西医科大学细胞生物学与遗传学教研室;广西壮族自治区肿瘤医院;
【关键词】： 内皮抑素 DNA序列 重组蛋白 纯化 鸡胚绒毛尿囊膜试验 诱导表达
【基金】：国家自然科学基金资助项目(编号:81260479) 广西自然科学青年基金资助项目(编号:2013GXNSFBA019143)
【分类号】：R3416
【正文快照】： 1前言传统的治疗癌症方法主要以手术和放、化疗为主,在杀死癌细胞的同时也破坏了正常细胞,毒副作用大,停药后易复发,且对患者生活质量造成很大影响.Folkman等[1]从小鼠内皮细胞瘤中分离得到一种抑制肿瘤新生血管形成因子—内皮抑素(Endostatin).内皮抑素是胶原蛋白l8分子的C末

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本文编号：1084872