重组人神经生长因子的高效表达和生物活性评价研究

发布时间：2017-10-25 03:05

  本文关键词：重组人神经生长因子的高效表达和生物活性评价研究

  更多相关文章： 重组人神经生长因子 CHO细胞 表达 生物活性

【摘要】：目的利用中国仓鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary,CHO)细胞真核表达系统,获得高产的人神经生长因子(recombinant human Nerve Growth Factor,rhNGF)表达细胞株并对其分泌的rhNGF生物学活性进行评价。方法设计、合成并构建了携带rhNGF目的基因的GS-DHFR双基因筛选表达载体pDG2.0/NGF。经脂质体转染法将其导入二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO DG44)中,经氨甲喋呤(MTX)和蛋氨酸亚氨基代砜(MSX)两种药物加压筛选和克隆化获得目的细胞株。经过阳离子交换和分子筛纯化,获得rhNGF制品。最后,利用小鼠神经生长因子生物学活性参比品评估纯化制品的生物学活性。结果通过基因合成、载体构建、细胞转染、加压筛选和克隆化等步骤,我们得到了高表达rhNGF的CHO-DG44单克隆细胞株。经过2步法纯化获得了纯度大于98%的精制rhNGF制品。生物学活性分析表明,与市售小鼠NGF产品相比较,我们所表达的rhNGF具有更好的生物学活性。结论成功实现了rhNGF的高水平和高活性表达,为大规模工业化生产重组人神经生长因子奠定了坚实基础。
【作者单位】： 北京华安科创生物技术有限公司;
【关键词】： 重组人神经生长因子 CHO细胞 表达 生物活性
【基金】：海淀区科技专项计划资助(项目编号K20100115C)
【分类号】：R3416
【正文快照】： 目前市场上极度缺乏特异性的脑和神经保护剂类药物,此类药物也是研发难度极大的药物之一。神经生长因子(nerve growth factor,NGF)是最早被发现的神经营养素家族的成员之一,它对交感神经、中枢神经和周围神经系统神经元的生长、发育、分化及再生和功能特性的表达均具有重要的

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 赵强,俞萍,柳川,王会信;NGF体外生物学活性的定量测定方法[J];军事医学科学院院刊;1998年02期

2 熊华花,胡琼华,李泉水;神经生长因子与周围神经再生[J];江西医学院学报;2005年04期

3 孙剑瑞;杨波;杜英;宋来君;关方霞;胡祥;胡平生;徐虹;王云龙;;神经生长因子对神经干细胞增殖的影响[J];郑州大学学报(医学版);2006年02期

4 路晓淼;王恩群;;神经生长因子对骨髓基质细胞成骨分化影响的研究进展[J];安徽医药;2009年02期

5 袁瑞红;刘流;赵德萍;徐宏慧;孙家平;王福科;刘垠;;神经生长因子对瘢痕成纤维细胞影响的实验研究[J];陕西医学杂志;2010年02期

6 于肇英;;神经生长因子的研究[J];生理科学进展;1988年03期

7 王学铭;;神经生长因子诱导的基因编码一种转录调节因子[J];国外医学(卫生经济分册);1988年06期

8 范灵芝，陈蕙，，杨新科，刘彦仿;外周血中脑源性神经生长因子的克隆[J];神经解剖学杂志;1995年02期

9 谌宏鸣,吴良芳,保天然,周雪;小鼠神经生长因子的细胞内免疫组织化学阳性反应定位[J];神经解剖学杂志;2000年04期

10 尹元琴,任常山;人神经生长因子cDNA的体外扩增[J];中国公共卫生;2001年06期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 王婷婷;姜彦多;;神经生长因子对运动神经元保护作用的定量研究[A];面向二十一世纪的生物医学体视学和军事病理学论文摘要汇编[C];2000年

2 贾占峰;张海林;;神经生长因子对大鼠交感神经元钠离子通道的双重作用[A];中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会论文摘要汇编[C];2005年

3 井绪东;陈丽;张洹;;诱导大鼠骨髓间充质干细胞表达神经胆碱乙酰化转移酶[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年

4 吴佐泉;邱炜;丁继兵;肖同浩;;神经生长因子预防大鼠额叶皮质损伤后基底前脑胆碱能神经元变性[A];2001年全国中西医结合急救医学学术会议论文集[C];2001年

5 蒋应明;陈国友;卢琳;安华章;张意;曹雪涛;;炎性因子对人树突状细胞表达神经生长因子及其受体的调控作用及其信号转导机制研究[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年

6 刘晓柳;李光千;赵小明;范玉华;殷树仪;;大鼠心内神经节细胞神经生长因子的表达[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

7 陈素兰;姜志钢;赵建刚;吴爱菊;徐兰珍;郝静;;人胚骨骼肌中促运动神经生长因子的分离及生物效应分析[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年

8 刘佳梅;王秀力;陈东;;PC12细胞向神经元诱导分化的实验研究[A];2007年中国解剖学会第十届全国组织学与胚胎学青年学术研讨会论文摘要汇编[C];2007年

9 段文卓;宫海民;孙晓东;金光香;刘俊平;;MAP激酶信号系统对PC12细胞端粒酶和分化的影响[A];第六届海峡两岸心血管科学研讨会论文摘要集[C];2007年

10 薛斌;温传俊;;hNRAGE破坏E-cadherin／β-catenin介导的细胞之间的黏附[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年

中国重要报纸全文数据库 前2条

1 孙洪涛;世界首个神经生长因子产品获国家批准[N];医药经济报;2003年

2 ;神经受损冻干NGF有特效[N];医药经济报;2001年

中国博士学位论文全文数据库 前7条

1 方琳;激活素A促进鸡胚背根神经节神经突起生长作用及其机制研究[D];吉林大学;2008年

2 蒋应明;炎性因子对人树突状细胞表达神经生长因子及其受体的调控作用及其信号转导机制研究[D];第二军医大学;2005年

3 徐学武;重组低毒腺病毒表达的beta-内啡肽对CCI大鼠治疗作用的实验研究[D];第二军医大学;2008年

4 姚兵;大鼠消化道GnRH受体的研究[D];第四军医大学;2000年

5 李俊峰;神经生长因子及p75~(NTR)蛋白对肝细胞生物学作用的初步研究[D];暨南大学;2012年

6 谭涛;低频rTMS增强Aβ模型大鼠学习记忆功能的研究[D];天津医科大学;2013年

7 郝帅;紫杉醇和神经生长因子在嗅感觉神经元分化过程中的作用[D];中国医科大学;2010年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 乌优图;神经生长因子（NGF）对神经干细胞的分化以及对神经元轴突形成的影响[D];中国医科大学;2008年

2 夏智群;NGF和BDNF在炎性痛大鼠背根神经节和脊髓角的表达[D];天津医科大学;2002年

3 孙凌聪;己二酮诱导PC12细胞中毒模型的建立及神经生长因子的保护作用[D];武汉大学;2005年

4 费良健;雪旺细胞体外分离培养及甲基强地松龙对雪旺细胞分泌功能影响的研究[D];大连医科大学;2008年

5 周琼;NGF体外诱导hMSCs分化为神经元样细胞[D];南华大学;2008年

6 万瑶;P物质与神经生长因子对正常人外周血中NK细胞杀伤活性的影响[D];中国医科大学;2006年

7 鹿文静;CGRP对HaCaT细胞增殖和凋亡及分泌NGF的影响[D];青岛大学;2008年

8 贝俊杰;M电流调节与大鼠SCG神经元兴奋性的关系[D];河北医科大学;2007年

9 杨向东;神经生长因子促进辣椒素诱导的背根神经节神经元P物质的释放[D];山东大学;2008年

10 白艳艳;人β-NGF基因在大肠杆菌与仓鼠卵巢细胞中的表达[D];苏州大学;2002年

本文编号：1091752