小鼠骨髓间充质干细胞定向诱导分化血管内皮细胞的实验研究

发布时间：2017-10-27 17:14

  本文关键词：小鼠骨髓间充质干细胞定向诱导分化血管内皮细胞的实验研究

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【摘要】：目的探讨体外小鼠骨髓间充质干细胞(mBMMSCs)的分离培养对其定向诱导分化为血管内皮细胞(VECs)的可行性。方法采用全骨髓贴壁法,分离骨髓间充质干细胞(MSCs)体外纯化培养并传代,倒置显微镜观察原代细胞形态变化,采用生长曲线法及3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法观察传代细胞生长特性。采用第3代mBMMSCs在内皮细胞生长培养基(EBM-2)中以血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)进行定向诱导,观察细胞形态学变化;流式细胞仪分析比较第3代mBMMSCs及诱导后细胞DNA周期、细胞免疫表型的变化;免疫细胞荧光技术分别检测CD31、vWF和CD34表达及摄取Di-lac-LDL结合FITC-UEA-1的功能特点;体外血管形成实验检测血管内皮细胞的功能。结果 mBMMSCs原代培养呈长梭形、漩涡状排列生长,P1、P2、P3细胞生长曲线及MTT法显示呈潜伏期、对数生长期及平台期生长。诱导后的部分细胞形态可见类似血管内皮样改变,呈多角形、短梭形、铺路石样排列生长;细胞周期分析显示,第3代mBMMSCs G0/G1期为86%,诱导分化后的细胞G0/G1期为92%,细胞DNA周期无明显差异;第3代mBMMSCs免疫表型结果显示为CD105、CD90、CD73、CD44阳性表达,而CD34、CD45、VEGF(CD309)、CD14阴性表达;诱导分化后的细胞VEGF(CD309)、CD34弱阳性表达,而CD105、CD90、CD73、CD44、CD45、CD14阴性表达;细胞免疫荧光技术检测第3代mBMMSCs表面CD31、vWF和CD34阴性表达,不具有摄取Dil-ac-LDL、结合FITC-UEA-1的功能特点及形成血管管腔样结构;诱导后的细胞表达VECs特异性表面标志CD31、vWF和CD34,具有摄取Di-lac-LDL、结合FITC-UEA-1的功能特点及体外可形成血管管腔样结构。结论采用全骨髓贴壁法培养的mBMMSCs在体外具有定向诱导分化为VECs的潜能,成为血管组织工程理想的细胞来源。
【作者单位】： 首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室;北京市心肺血管疾病研究所实验中心;首都医科大学附属北京安贞医院心外科;
【关键词】： 骨髓间充质干细胞 血管内皮细胞 诱导分化 小鼠
【基金】：国家自然科学基金资助项目(编号:81370228) 省部共建重点教育部心血管重塑相关疾病重点实验室项目(编号:110267) 北京市自然科学基金资助项目(编号:7072012) 北京市优秀人才培养资助项目(编号:2012D003034000009)
【分类号】：R329
【正文快照】： 血管移植技术已广泛应用于心血管疾病、肿瘤、创伤、器官移植再造及显微外科手术中[1]。自体血管其组织相容性好、无免疫排异反应,是最为理想的血管移植物,但由于患者常合并有血管疾病,缺乏可供移植的自体血管,因此,其临床应用受到限制[2]。组织工程化血管构建与功能研究已成

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 张燕搏;王强;;组织工程化血管研究进展[J];中华实用诊断与治疗杂志;2012年04期

2 董学君;孙荷;张国荣;项黎新;潘若浪;陈烨;张瑞鹏;邵健忠;;骨髓间充质干细胞的多向分化潜能研究进展[J];中国细胞生物学学报;2010年01期

3 康少平;姜文静;李萍;;骨髓间充质干细胞向内皮细胞的分化和临床应用[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年49期

4 赵瑛;蔡绍皙;;鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及定向诱导分化为内皮样细胞[J];中国应用生理学杂志;2010年01期

5 曾莉;常以力;邵毅;;血管内皮生长因子反义寡脱氧核苷酸联合血管生成素-1对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜血管渗漏及新生血管生成的影响[J];眼科新进展;2012年10期

6 辛毅;刘小希;赵伟;刘飒;李娜;许秀芳;黄益民;罗毅;张宏家;;差速贴壁法分离兔骨髓源性间充质干细胞和内皮祖细胞及其生物学特性的研究[J];中国实验血液学杂志;2013年03期

7 邵毅;余静;余瑶;高桂平;杨继玲;裴重刚;涂萍;李亨辉;;无缝线骨髓间充质干细胞羊膜移植预防角膜缘干细胞缺乏的实验研究[J];眼科新进展;2013年11期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 邢昕;吕蓉;李素萍;刘忠;;体外分离培养人源性脂肪间充质干细胞及其鉴定[J];中国输血杂志;2013年08期

2 李陈;肖玉周;;不同来源的间充质干细胞生物学特性差异研究进展[J];创伤外科杂志;2014年01期

3 王圣;李温斌;武喜红;马金辉;程兆云;赵子牛;;组织工程猪肺动脉带瓣管道的免疫学特征[J];中华实用诊断与治疗杂志;2013年09期

4 许薇薇;黄一飞;;人脂肪组织来源干细胞眼科基础研究应用现状[J];解放军医学院学报;2013年09期

5 何宏亮;李建国;高志良;;人工肝和干细胞在肝衰竭治疗中的进展[J];临床肝胆病杂志;2013年09期

6 Juan Xu;Bo Yu;Christine Hong;Cun-Yu Wang;;KDM6B epigenetically regulates odontogenic differentiation of dental mesenchymal stem cells[J];International Journal of Oral Science;2013年04期

7 庞希宁;王竟;施萍;孟涛;霍双枝;张殿宝;谭丽萍;;人羊膜间充质干细胞的超微结构观察[J];基础医学与临床;2013年11期

8 庞希宁;刘晓玉;施萍;王竟;林学文;张殿宝;谭丽萍;;人羊膜间充质干细胞储备库的构建[J];基础医学与临床;2013年11期

9 方宁;王钰莹;陈代雄;余丽梅;章涛;赵春华;;静脉移植人羊膜间充质干细胞改善大鼠心肌梗死后心功能[J];基础医学与临床;2013年12期

10 方宁;李丹;余丽梅;章涛;赵春华;陈代雄;;人羊膜间充质干细胞对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的疗效及免疫调节作用[J];免疫学杂志;2014年01期

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 朱天琦;GDNF和NT-3双基因诱导BMSCs分化为神经样细胞的实验研究[D];华中科技大学;2013年

2 苟丽娟;人骨髓间充质干细胞诱导分化为软骨细胞过程中microRNA作用机制研究[D];北京协和医学院;2013年

3 陈书连;1、骨髓间充质干细胞对小鼠异基因骨髓移植后aGVHD的作用研究 2、成人急性淋巴细胞白血病自体移植的临床研究及相关预后因素[D];北京协和医学院;2013年

4 关剑;胰腺癌间充质干细胞样肿瘤相关纤维母细胞功能研究及维甲酸对肿瘤相关纤维母细胞抑制性研究[D];北京协和医学院;2013年

5 杨舟鑫;CD106是具有强免疫调节功能的胎盘绒毛膜间充质干细胞的标志[D];北京协和医学院;2013年

6 付苏;脂肪来源基质血管成分细胞与脂肪颗粒共移植后的生物学转归[D];北京协和医学院;2013年

7 王有为;脐带间充质干细胞临床前安全性研究[D];北京协和医学院;2013年

8 李阳;人脂肪间充质干细胞向雪旺细胞的诱导分化及对外周面神经损伤修复的实验研究[D];北京协和医学院;2013年

9 丁晓霜;骨髓基质干细胞治疗局部脑缺血作用机制研究[D];北京协和医学院;2013年

10 及月茹;人脐带间充质干细胞促进B细胞增殖和终末分化[D];北京协和医学院;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 曲戈;IL-24基因修饰的间充质干细胞向肺癌靶向迁移的体外研究[D];郑州大学;2013年

2 徐扬阳;重组人碱性成纤维细胞生长因子对脂肪干细胞分化的影响[D];郑州大学;2013年

3 杨颖珂;骨髓间充质干细胞移植对脑出血大鼠血肿周围凋亡及P75NTR、TrkA表达的影响[D];郑州大学;2013年

4 左彬;SD大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）体外培养方法改良[D];郑州大学;2013年

5 马云鹏;应用大块平铺法对人脐带间充质干细胞分离、传代、冻存及复苏的研究[D];河北医科大学;2013年

6 刘方方;大鼠口腔黏膜上皮细胞诱导骨髓间充质干细胞向上皮细胞分化的体外研究[D];河北医科大学;2013年

7 王学良;乳腺癌MDA-MB-231细胞中CD105~+/CD90~+细胞群的特性研究[D];河北医科大学;2013年

8 马欣;模拟肝脏组织微环境对人脐带间充质干细胞向肝细胞样细胞分化的影响[D];河北医科大学;2013年

9 李涵;富勒烯衍生物调控肿瘤微环境中成纤维细胞功能的初步研究[D];河北医科大学;2013年

10 郑淑娟;BMSCs对SD大鼠糖尿病溃疡创基成纤维细胞作用的研究[D];山西医科大学;2013年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张燕搏;姜明;王强;唐秀杰;杨秀滨;胡平;吴清玉;;组织工程血管材料体外细胞毒性评价实验研究[J];中华实用诊断与治疗杂志;2011年06期

2 张燕搏;姜明;胡平;吴清玉;王强;王旭;;聚氨酯不同低温等离子体改性及生物相容性评价[J];中华实用诊断与治疗杂志;2011年10期

3 张燕搏;姜明;王强;吴清玉;胡平;;动态反应器构建组织工程化血管的初步实验研究[J];中华实用诊断与治疗杂志;2011年11期

4 张燕搏;王强;;低温等离子体技术在生物医用材料改性中的应用[J];中华实用诊断与治疗杂志;2012年01期

5 ;Expression of Pdx-1 in bone marrow mesenchymal stem cells promotes differentiation of islet-like cells in vitro[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2006年05期

6 刘学政;王继红;冯闯;;血管生成素-1对糖尿病大鼠视网膜微血管渗漏的保护作用[J];辽宁医学院学报;2010年04期

7 蒋晶晶;武晓泓;刘翠萍;徐宽枫;茅晓东;刘超;;小鼠骨髓间充质干细胞和内皮祖细胞的分离、培养及鉴定[J];南京医科大学学报(自然科学版);2007年07期

8 段江洁;田静;姜蓉;汪维伟;;去上皮羊膜及其浸提液体外诱导骨髓间充质干细胞的分化[J];中国生物制品学杂志;2012年09期

9 董悦;张雷;邵素霞;尹青;陈炜;赵春芳;;骨髓干细胞诱导形成的内皮细胞在体内外环境中的稳定性[J];细胞生物学杂志;2009年06期

10 郭新,李伟,朱桂彬,何旭,张丽红,李玉林,李一雷;基质蛋白与整合素参与人骨髓间充质干细胞体外内皮的分化[J];中国临床康复;2005年14期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 吕菁君;;骨髓干细胞移植治疗冠心病的研究进展[J];国外医学.老年医学分册;2002年05期

2 徐春玲;苏冠方;牟大鹏;;乳鼠视网膜细胞诱导骨髓间充质干细胞分化为视网膜神经节样细胞[J];眼科研究;2008年03期

3 常宏;蒋绍艳;史玉朋;宋丹妮;;丹参注射液诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的研究[J];中国药房;2008年30期

4 杨柏梁;郭丽;任淑萍;张桂英;李鹏;肖博晗;刘雅娟;;骨髓间充质干细胞对糖尿病大鼠疗效观察[J];中国公共卫生;2009年08期

5 陈秉耀;侯树勋;祁彦霞;阕海萍;刘少君;;成人骨髓间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞后的维持培养[J];中国脊柱脊髓杂志;2006年06期

6 张金池;王敬瀚;郭平凡;王中心;;体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞分化的研究[J];中国中西医结合外科杂志;2006年04期

7 钟淑琦;曹博;申景岭;郭筠秋;张宝东;冯秀清;陈雅隽;杨志文;;体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞的分化[J];哈尔滨医科大学学报;2011年02期

8 谢模英,杨慧民,y囐，

本文编号：1104413