金黄色葡萄球菌agr基因敲除及其对膜泡毒力影响

发布时间：2017-10-31 20:40

  本文关键词：金黄色葡萄球菌agr基因敲除及其对膜泡毒力影响

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【摘要】：目的利用同源重组技术构建金黄色葡萄球菌RN4220附属基因调节系统(agr)的敲除株,探讨agr基因缺失对金黄色葡萄球菌分泌膜泡毒力的影响。方法分别扩增agr基因的上下游同源臂,利用重叠PCR获得agr基因上下游同源臂的融合片段,经酶切后连接敲除载体PYT3,构建同源重组质粒pYT3::Δagr,电转化至金黄色葡萄球菌RN4220,利用pYT3质粒对温度敏感的特点筛选agr缺失的突变株。分别制备野生菌RN4220和突变株RN4220::Δagr的膜泡,小鼠毒力实验观察agr基因缺失后对金黄色葡萄球菌膜泡毒力的影响。结果同源重组质粒pYT3::Δagr通过酶切鉴定证明构建成功;经PCR及DNA测序证实获得金黄色葡萄球菌RN4220 agr缺失突变株,重组效率为5.6%;agr突变株与野生株相比,其分泌膜泡的毒力大大降低,72 h内小鼠存活率为100%。结论 agr基因缺失后能够显著降低膜泡的毒力。
【作者单位】： 第三军医大学基础医学部微生物学教研室 重庆市微生物工程实验室;第三军医大学新桥医院急诊科;
【关键词】： 金黄色葡萄球菌 膜泡 同源重组 附属基因调节系统
【基金】：国家自然科学基金(31270979) 国家重大科技专项(2012ZX09103301-038) 重庆市自然科学基金(CSTC2012jjA10066)~~
【分类号】：R378
【正文快照】： 细菌膜泡(membrane vesicles,MVs)是以出芽方式从细菌表面分泌的球形双层膜结构,直径20~200 nm,是细菌分泌胞外因子的重要机制之一[1]。MVs可携带细菌的多种成分,如细菌脂多糖、毒素、毒性酶、表面蛋白以及细菌的DNA,因此,致病菌产生的MVs往往具有一定的毒力,参与细菌的致病

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 唐俊妮;周锐;王红宁;曾志光;;附属基因调节子在葡萄球菌生物被膜形成与感染中的作用[J];中南大学学报(医学版);2008年11期

【共引文献】

中国博士学位论文全文数据库 前4条

1 李鹏;副猪嗜血杆菌分子流行病学及其OMP-P2基因抗原性与检测技术研究[D];南京农业大学;2011年

2 刘英玉;副猪嗜血杆菌耐药性调查和耐药机制研究[D];华中农业大学;2013年

3 唐e，

本文编号：1123680