人永生化表皮细胞HaCaT电转染条件的优化

发布时间：2017-11-01 02:22

  本文关键词：人永生化表皮细胞HaCaT电转染条件的优化

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【摘要】：目的比较不同电转染条件下,人永生化表皮细胞HaCaT的转染效率,探讨影响HaCaT电转染率和存活率的主要因素,筛选出HaCaT细胞最佳的电转染条件。方法应用电穿孔仪,设定不同的电压(180、360、540、720V)、脉冲时间(40、60、80、100、120μs)、脉冲周期(1、2、3、4、5次)和温度(室温和4℃)等条件,将质粒(pGPU6/GFP/nev)电转染至HaCaT细胞。电转染24h后,荧光镜下和光镜下分别计算绿色荧光阳性细胞数和总细胞数,并随机取3个视野算平均值,计算电转染率;MTT法检测电转染后细胞的存活率。结果当HaCaT细胞浓度为1.5×106/mL,pGPU6/GFP/nev质粒浓度为2.0μg/mL,HaCaT细胞的最佳电转染条件为540V/60μs/Pulse1/RT,此时细胞生长状态最佳,电转染率可达到33.23%,细胞存活率为61.22%。结论本实验优化了HaCaT细胞电转染的最佳条件,提高了HaCaT细胞电转染效率,为后续基因功能的研究奠定了基础。
【作者单位】： 西安交通大学医学院第一附属医院泌尿外科;西安交通大学医学院环境和疾病相关基因教育部重点实验室;
【关键词】： HaCaT 电转染 转染条件
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No.81171953)~~
【分类号】：R329.2
【正文快照】： HaCaT细胞是一种人永生化表皮细胞系,具有表皮基底层细胞的分化特性,与原代角质形成细胞相同,遗传特性稳定,不具有肿瘤特性[1]。HaCaT细胞可代替人正常角质形成细胞,是皮肤疾病研究中理想的细胞模型,可用于检测各种药物和理化因素对人正常角质形成细胞的影响,是研究上皮性器质

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