细胞穿透肽Tat-LK15介导siRNA的转染效率和细胞毒性研究

发布时间：2017-11-07 04:38

  本文关键词：细胞穿透肽Tat-LK15介导siRNA的转染效率和细胞毒性研究

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【摘要】：通过与Lipofectamine TM RNAi MAX(Lipo)比较,探讨细胞穿透肽Tat-LK15对人肾上皮细胞(human embryonic kidney 293T cells,293T)和大鼠视神经节细胞(retinal ganglion cell line,RGC-5)转染小干扰RNA(small interference RNA,si RNA)的效率和细胞毒性,为后期实验提供依据。以羧基荧光素(carboxyfluorescein,FAM)标记的si RNA为报告基因,不同剂量的Tat-LK15(Tat-LK15组)和Lipo(Lipo组)为转染试剂,分别转染293T和RGC-5细胞。转染24 h后荧光显微镜观察FAM荧光强度,计算转染效率,并以CCK-8法检测细胞毒性。随着Tat-LK15和Lipo剂量的增加,si RNA转染效率逐渐提高。当Tat-LK15与si RNA配比为2∶1(μg/μg)时,RGC-5细胞的转染效率达到最高((87.3±4.5)%),低于Lipo与si RNA配比为5∶1(μL/μg)时的最高转染效率((96.2±3.2)%(P0.05));作用于293T细胞时,两转染试剂的最高转染效率没有统计学差异(P0.05)。转染试剂剂量增加,Lipo细胞毒性显著增加,而Tat-LK15毒性无明显变化。转染效率最高时,Lipo(5μL)组293T和RGC-5的细胞存活率仅为((77.8±4.1)%,(73.4±7.7)%)显著低于Tat-LK15(2∶1)组同种细胞的存活率((91.0±3.7)%,(90.0±6.1)%)(P0.05)。Tat-LK15可有效地转染si RNA,细胞毒性低,安全性突出,有一定的应用前景。
【作者单位】： 南方医科大学;广州军区广州总医院麻醉科;中国人民解放军第421医院;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81100817;81371233)
【分类号】：R3416
【正文快照】： RNA干扰技术在生物医学研究中已被广泛应用[1],而转染试剂作为其关键因素一直得到大量关注。常用的小干扰RNA(si RNA)转染方法有病毒载体法、阳离子脂质体介导法和阳离子聚合物法[2,3]。病毒载体转染效率高,但其制备过程复杂、价格昂贵,免疫原性和生物安全性问题也限制了它的

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本文编号：1150900