过表达Claudin-5增强体外培养的人视网膜微血管内皮细胞屏障功能

发布时间：2017-11-07 05:15

  本文关键词：过表达Claudin-5增强体外培养的人视网膜微血管内皮细胞屏障功能

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【摘要】：【目的】探讨过表达Claudin-5后对视网膜血管内皮细胞屏障功能的影响。【方法】体外原代培养人视网膜血管内皮细胞(hRVEC)。当接种至transwell膜的P2~P5代hRVEC近60%融合时进行慢病毒介导的转染实验。hRVEC分为对照组,慢病毒空载体组,慢病毒介导的Claudin-5高表达转染组。荧光活细胞动态显微镜观察慢病毒介导的转染效率。Western Blot检测各组细胞中Claudin-5表达水平。CCK8法检测病毒转染对细胞的毒性。待接种至transwell膜的hRVEC培养2周后建立稳定的单层人视网膜血管内皮细胞屏障模型后,电阻仪检测hRVEC屏障的跨内皮电阻(TER),异硫氰酸荧光素右旋糖酐检测hRVEC屏障的通透性。【结果】慢病毒可以介导Claudin-5在hRVEC高表达,其转染率达60%,Western Blot检测证实Claudin-5蛋白表达显著增加。CCK8检测表明慢病毒转染不影响细胞的活性,对细胞毒性小;过表达Claudin-5后也不影响hRVEC的增殖;过表达Claudin-5后能降低体外单层人视网膜血管内皮细胞屏障模型的通透性,并提高其TER。【结论】过表达Claudin-5后可以显著提高体外人视网膜血管内皮细胞屏障的功能,这为视网膜血管性疾病的治疗提供新思路。
【作者单位】： 中山大学中山眼科中心//眼科学国家重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金(30872819,81170864) 教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET-09-0809) 中山大学青年教师培育项目(10ykpy27)
【分类号】：R346
【正文快照】： 随着对糖尿病视网膜病变、黄斑水肿、早产儿视网膜病变、视网膜中央静脉阻塞等世界范围内主要的致盲眼病发病机制的深入研究,各种因素如氧化应激、缺氧、炎症导致的血-视网膜内屏障(inner blood-retinal barrier,iBRB)的紧密连接(tight junction,TJ)的破坏被认为是引起这类视

【共引文献】

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本文编号：1150994