抗尖吻蝮蛇毒卵黄抗体的制备与纯化及其中和活性研究

发布时间：2017-11-07 16:03

  本文关键词：抗尖吻蝮蛇毒卵黄抗体的制备与纯化及其中和活性研究

  更多相关文章： 免疫 抗尖吻蝮蛇毒IgY 中和 灌胃

【摘要】：抗毒血清是目前治疗蛇伤的唯一特效药,然而,其生产的高成本、低得率及引发诸多副作用(过敏性休克、致热反应及血清病等)等不足,使得寻找更理想的蛇毒解毒剂变得十分迫切。因卵黄抗体(Ig Y)具有生产成本低、产量高、安全性好等优点,成为开发新蛇毒解毒剂的重要研究对象,它被认为是一种可能替代抗蛇毒血清的新型解毒剂。本研究通过免疫白来航鸡,从其所产鸡蛋中成功制备出抗尖吻蝮蛇毒Ig Y,并对其中和活性及口服可行性进行了分析。获得主要结论如下:①从初次免疫结束到第4周,抗尖吻蝮蛇毒Ig Y的活性逐渐增强,在第4周达到最高水平并维持至免疫过程终止。鸡血清抗体活性与Ig Y活性变化一致。②采用“辛酸-硫酸铵”法批量纯化Ig Y,Ig Y的分子量为180k Da,其中轻链为25 k Da,重链为65 k Da,Ig Y的产量为101.66mg Ig Y/蛋。③间接ELISA法测定抗尖吻蝮蛇毒Ig Y的效价为1:80 000,免疫双向扩散测定其效价为1:16。④抗尖吻蝮蛇毒Ig Y能与白唇竹叶青及黑眉蝮蛇毒发生交叉反应,不能同眼镜蛇及银环蛇毒发生交叉反应。尖吻蝮蛇毒可能与白唇竹叶青蛇毒或黑眉蝮蛇毒这类同属一个亚科的蛇毒含有的共同抗原决定簇多,而与银环蛇毒或眼镜蛇毒这类来自于眼镜蛇科的蛇毒含的共同抗原决定簇极少。⑤抗尖吻蝮蛇毒Ig Y能中和尖吻蝮蛇毒的PLA2活性、5’-核苷酸酶活性、透明质酸酶活性、纤维蛋白原凝结活性、纤维蛋白水解活性、CK酶活性、蛋白水解酶活性、出血活性、水肿活性以及3×LD50蛇毒对小鼠的攻击等,并且本身无酶活性及毒性。⑥抗蛇毒Ig Y是非有毒物类。采用ELISA及Western blot均未能从灌胃的小鼠血清中检测到活性Ig Y。本研究成功制备出抗尖吻蝮蛇毒Ig Y,其中和能力强,是一种极富前景的蛇毒解毒剂。但本文对Ig Y口服可行性的研究还不够深入,有待进一步论证。
【学位授予单位】：重庆师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张晓萍,黄浩龙,朱祖康,陈杰,赵茹茜;胆囊收缩素卵黄抗体在大鼠十二指肠的吸收[J];动物学报;2004年03期

2 黄松;黄接棠;;乌梢蛇血清的抗出血因子:一个有前途的抗蛇毒药物原料(英文)[J];动物学报;2006年06期

3 傅蓉,李珑,王中来,林向阳,林秀梅,饶平凡;鸡卵黄免疫球蛋白的嗜硫性色谱一步分离纯化[J];福州大学学报(自然科学版);2000年06期

4 郑立勇;乔彦良;马凤龙;丁超;毕可东;王兆学;刘平平;刘焕珍;;卵黄抗体不同提取方法的比较[J];黑龙江畜牧兽医;2009年01期

5 段琳;赵文锋;丁建坤;吴梧桐;刘景晶;;卵黄抗体开发现状及应用进展[J];中国生化药物杂志;2010年03期

6 王薇,余清声,王桂平;鸡卵黄抗眼镜王蛇毒抗体IgY的理化特性[J];蛇志;2003年04期

7 吕小凤,吕宗友;抗五步蛇毒血清治疗五步蛇咬伤175例[J];蛇志;1998年01期

8 苏昀,周性明,陈甸英,张忠林;正常人精子透明质酸酶活性测定[J];铁道医学;1998年01期

9 易全茂,谢艳霞;鸡卵黄抗体研究进展[J];动物科学与动物医学;2004年02期

10 王桂平;余清声;刘新艳;朱柳;覃媛;黄劭;;卵黄抗体用于蛇毒抗原检测的初步研究[J];中国药理学通报;2005年11期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 祁俊华;双价抗蛇毒鸡卵黄抗体的制备及其特性研究[D];广州医学院;2009年

，

本文编号：1153099