荷瘤小鼠脾脏髓源抑制细胞的分选及鉴定

发布时间：2017-11-08 06:24

  本文关键词：荷瘤小鼠脾脏髓源抑制细胞的分选及鉴定

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【摘要】：目的研究荷瘤小鼠脾脏中髓源抑制细胞(myeloid derived suppresser-cell,MDSCs)的分选与鉴定方法。方法常规培养小鼠肾癌细胞(Renca细胞),于Balb/c小鼠皮下建立小鼠肾癌模型;分离小鼠脾脏制成单细胞悬液,磁珠分选Gr-1+CD11b+双阳性的MDSCs;台酚蓝染色检测细胞存活率;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)测其细胞纯度;显微镜下观察细胞形态;免疫荧光测其表面Gr-1、CD11b荧光表达情况;RT-PCR检测Cox2和Arg-1的m RNA的表达情况;小鼠皮下成瘤实验观察MDSCs促肿瘤生长。结果成功建立小鼠肾癌模型,磁珠分选后经FCM检测Gr-1+CD11b+双阳性的MDSCs细胞可达92.3%,显著高于分选前(P0.01);免疫荧光鉴定结果显示:分选后的细胞形态完整,Gr-1和CD11b的荧光表达于细胞膜且2种荧光可以融合;RT-PCR检测分选后的MDSCs细胞群的Cox2和Arg-1的m RNA相对表达量显著高于分选前(P0.05);小鼠皮下成瘤观察到MDSCs组与实验对照组有显著差异(P0.05)。结论用免疫磁珠从荷瘤小鼠脾脏中成功分选得到MDSCs,具有较高纯度和良好的生物活性,为后续实验提供了理想的细胞来源。
【作者单位】： 重庆医科大学附属第一医院泌尿外科;重庆医科大学检验医学院;
【基金】：国家自然科学基金(81272572)
【分类号】：R392
【正文快照】： 髓源抑制性细胞(myeloid derived suppresser-cells,MDSCs)是一群缺乏淋巴系标志具有多方向分化潜能和免疫抑制功能的异质性细胞,它包括未成熟树突状细胞(DCs)、巨噬细胞、粒细胞和其他早期分化阶段的髓系细胞。MDSCs的共同特性是它们的髓系来源、未成熟状态、对T细胞应答的显

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