人心肌肌钙蛋白I 和I-C复合物的原核表达及抗cTnI单克隆抗体的制备

发布时间：2017-11-08 09:03

  本文关键词：人心肌肌钙蛋白I 和I-C复合物的原核表达及抗cTnI单克隆抗体的制备

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【摘要】：目的:通过大肠杆菌BL21原核表达获得能够替代天然人源c Tn I的蛋白产物,并用于Balb/c小鼠免疫,制备出高特异性高亲和力的抗人c Tn I的单克隆抗体,为后续检测方法的建立奠定基础。方法:人工合成目的基因c Tn I-linker-Tn C,针对单体蛋白c Tn I和c Tn C的目的基因分别设计引物,通过PCR方法获得c Tn I和c Tn C的目的基因,然后分别构建重组大肠杆菌BL21,可溶性表达目的蛋白c Tn I、c Tn C和c Tn I-linker-Tn C,纯化鉴定后用c Tn I-linker-Tn C复合物和标准c Tn I蛋白单体免疫六周龄Balb/c小鼠,通过经典的杂交瘤技术筛选分泌抗c Tn I单抗的阳性杂交瘤细胞株,制备腹水型单克隆抗体并鉴定。结果:成功的构建了三种目的蛋白(c Tn I、c Tn C和c Tn I-linker-Tn C)的重组表达菌株BL21,并实现了高可溶性表达,对重组表达的目的蛋白c Tn I、c Tn C和c Tn I-linker-Tn C进行免疫原性鉴定,结果均具有很好的免疫原性,初步认为可以替代天然人源c Tn I并用于后续免疫和检测。标准c Tn I蛋白单体免疫并经细胞融合后成功的筛选到8株抗人c Tn I的阳性杂交瘤细胞株,其中6H7和4A8的腹水型单抗效价可达4万。用原核表达的c Tn I-linker-Tn C免疫Balb/c小鼠,经细胞融合后的融合率为100%且阳性率可达30%,且原始孔细胞上清OD值超过2.0的克隆株有18株,进一步筛选工作正在进行之中。结论:成功的实现了目的蛋白c Tn I、c Tn C和c Tn I-linker-Tn C的高可溶性原核表达,且很好的保持了免疫原性,可以用于后续检测和免疫,有望成为天然蛋白的替代物。成功的筛选到了抗人c Tn I的阳性杂交瘤细胞株,并为后续检测方法的建立打下了基础。
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392

【参考文献】

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本文编号：1156467