anoctamin 1在中国仓鼠卵巢细胞中的表达及其离子通道特性

发布时间：2017-11-11 10:25

  本文关键词：anoctamin 1在中国仓鼠卵巢细胞中的表达及其离子通道特性

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【摘要】：目的:探讨anoctamin 1在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中的表达情况,分析其离子通道特性,为研究钙激活氯离子通道的生理功能提供实验依据。方法:PCR方法获得anoctamin 1编码区基因,构建pcDNA3.1-anoctamin 1真核表达载体。脂质体转染anoctamin 1至CHO中,抗生素筛选获取稳定表达anoctamin 1的CHO株。应用RT-PCR技术和倒置荧光显微镜检测anoctamin 1于CHO中的表达和分布情况。应用卤族元素敏感的黄色荧光蛋白双突变体YFP-H148Q/I152L检测anoctamin 1离子通道的功能。以加入calcimycin和高浓度碘离子的PBS缓冲液的为实验组,未加入calcimycin和高浓度碘离子的PBS缓冲液的为对照组。结果:限制性内切酶酶切后的琼脂糖凝胶电泳和测序,目的基因anoctamin 1克隆至真核表达载体pcDNA3.1;RT-PCR和倒置荧光显微镜观察,CHO在mRNA和蛋白水平表达anoctamin 1,且anoctamin 1蛋白主要表达于CHO膜上;荧光淬灭动力学实验,CHO表达的anoctamin 1具有转运碘离子的作用,且实验组碘离子转运速度显著高于对照组(P0.05)。结论:anoctamin 1可高效表达于CHO膜;CHO表达的anoctamin 1具有经典钙激活氯离子通道特性。
【作者单位】： 吉林医药学院生物化学检验教研室;吉林医药学院实验中心;吉林医药学院病原教研室;
【基金】：吉林省教育厅科研基金资助课题(2013-351) 吉林省大学生创新创业训练计划资助课题(2013,2014) 吉林医药学院大学生科研基金资助课题(吉医学科字[2012]第12号)
【分类号】：R363
【正文快照】： anoctamin 1是最近发现的在哺乳动物细胞膜上广泛表达的一类阴离子通道,因其主要激活方式是通过胞浆中游离钙离子,故也称之为钙激活氯离子通道。细胞内钙离子浓度升高时,某些特定的生物活性物质与细胞膜上的G蛋白偶联受体结合,通过一系列级联反应促使内质网中钙离子释放,进而

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本文编号：1171017