FXYD5基因真核表达载体的构建及其功能的初步研究

发布时间：2017-11-11 11:19

  本文关键词：FXYD5基因真核表达载体的构建及其功能的初步研究

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【摘要】：目的构建大鼠离子通道相关蛋白(FXYD5)基因真核表达载体,研究其对大鼠胸主动脉平滑肌细胞(CRL-1444)的体外作用。方法以含FXYD5全长cDNA的pBluescriptⅡKS(+/-)载体为模板,并用PCR方法扩增,将其连接于真核表达质粒pcDNA3.1(+),PCR、双酶切和测序鉴定后,用脂质体包裹转染大鼠胸主动脉细胞,转染重组真核表达载体为实验组(PF组),转染空质粒PCDNA3.1(+)为阴性对照组(NC组)和未做处理的为空白对照组(BC组)。Real-time PCR定量检测各组FXYD5的表达水平,并研究该基因对CRL-1444细胞膜钠钾泵(Na~+-K~+-ATPase)活性、细胞增殖能力、迁移力的影响。结果重组的真核表达载体pcDi4A3.1(+)-FXYD5构建成功,PF组FXYD5的表达水平较BC组上调17.312倍(P0.05),PF组的细胞膜Na~+-K~+-ATPase活性高于BC组和NC组(均P0.05),细胞增殖能力和迁移力均高于NC组(均P0.05)。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-FXYD5,并在CRL-1444细胞中使FXYD5基因的表达水平增加,且增强CRL-1444细胞膜的Na~+-K~+-ATPase活性、细胞增殖和迁移能力。
【作者单位】： 温州医科大学附属第二医院ICU;温州医科大学附属第一医院心内科;杭州师范大学附属医院心内科;
【基金】：卫生部科学研究基金(wkj-2008-2-031)
【分类号】：R3416
【正文快照】： 近年的研究结果表明,高血压病是一种遗传易患性加环境诱导共同作用下导致的,特别是家族多 发性高血压病患者具有很强的遗传倾向[1],并且该类患者较无高血压家族史的血压正常高值血管内皮损伤更明显p]。FXYD蛋白家族最近被证明是一个组织特异性调节Na+-K+-ATPaSe的小跨膜蛋白p

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 陈长曦;杨德业;余祖善;洪承吕;张怀勤;黄晓燕;宋后燕;;自发性高血压大鼠FXYD5基因的实验研究[J];中华高血压杂志;2007年02期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 王本极;潘嘉林;黄晓燕;施翔翔;程碧环;金胜威;杨德业;;FXYD5基因真核表达载体的构建及其功能的初步研究[J];心电与循环;2014年01期

2 施翔翔;高瞻;伍新雷;黄周青;杨德业;;RNA干扰血管平滑肌细胞高血压相关基因FXYD5表达及其功能研究[J];温州医学院学报;2013年10期

3 方飞;李小旺;施翔翔;黄晓燕;龚永生;张怀勤;杨德业;;自发性高血压大鼠FXYD5基因表达的时空分布[J];中国病理生理杂志;2009年03期

4 李小旺;方飞;施翔翔;黄晓燕;张怀勤;杨德业;;大鼠FXYD5基因的克隆及重组腺病毒载体的构建[J];温州医学院学报;2008年04期

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 初少莉,朱鼎良,王谷亮,熊墨淼,金力;13种参与血管调节基因位点与中国人高血压病的连锁分析[J];中华内科杂志;2002年05期

2 原卫清,吕卓人,王颢,曹永孝,刘静;哇巴因抗体对肾血管性高血压大鼠的降压作用[J];高血压杂志;2000年01期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 牛嗣云;岳凤鸣;陈志宏;高维娟;高福禄;;人胰岛素样生长因子-1基因克隆及其真核表达载体的构建[J];解剖学杂志;2008年05期

2 彭武建,戴勇,李体远,杜珙,孙文学,陈德珩,徐卓佳;人组织激肽释放酶基因真核表达载体的构建与鉴定[J];广东医学;2003年12期

3 王福祥,孙永涛,李光玉;人白细胞介素-18真核表达载体的构建及测序分析[J];医学研究生学报;2004年02期

4 刘娟,孙永涛,杜德伟,李光玉,刘秋平,翟嵩;人中性粒细胞多肽1,3真核表达载体的构建与鉴定[J];医学研究生学报;2004年10期

5 陈昌杰,赵莉;人神经营养素-3基因真核表达载体的构建和鉴定[J];中国临床解剖学杂志;2004年06期

6 徐卓佳,戴勇,李体远,彭武建;重组人促红细胞生成素四环素调控真核表达载体的构建与鉴定[J];中国医师杂志;2005年09期

7 何炜,张朝,章茜,赵国强,董子明;真核表达载体pcDNA3.1-MAGE-1的构建[J];郑州大学学报(医学版);2005年04期

8 赵杰;张瑞;许予明;赵国强;郭建新;宋波;韩志强;;真核表达载体pEGFP-C_3-MASH-1的构建[J];医药论坛杂志;2006年08期

9 任淑婷;于琳华;徐长福;高广道;;四环素诱导性人肝细胞生长因子真核表达载体的构建与鉴定[J];南方医科大学学报;2006年10期

10 彭仕芳;傅蕾;谭德明;侯周华;;人可溶性肿瘤坏死因子受体1基因真核表达载体的构建[J];中国医学工程;2007年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 周仪华;王耀晟;何力鹏;鲍晓明;黄晓;程晓曙;;可溶性血管内皮细胞生长因子受体1真核表达载体pEGFP-N1/sflt-1的构建及在人脐静脉内皮细胞中的表达[A];中华医学会急诊医学分会第十三次全国急诊医学学术年会大会论文集[C];2010年

2 王怀鹏;蒲小勇;王行环;单志新;高炜城;杨中华;李世林;罗耀雄;徐战平;;巨噬细胞移动抑制因子基因真核表达载体的构建和鉴定[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年

3 邱明链;;真核表达载体pIRES2-EGFP-hFasL的构建及鉴定[A];2012中国器官移植大会论文汇编[C];2012年

4 程蓓;叶大风;谢幸;陈怀增;吕卫国;;人白细胞介素7基因克隆及其真核表达载体的构建[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年

5 吴涓涓;章晓联;;反义葡萄糖苷酶Ⅰ和分子伴侣钙联蛋白基因真核表达载体的构建[A];湖北省暨武汉市免疫学会第八届学术会议论文集[C];2003年

6 承海;糜漫天;张乾勇;;ω-3脂肪酸依赖的跨膜型TNFα真核表达载体的构建及抗癌效应研究[A];中国营养学会第九次全国营养学术会议论文摘要汇编[C];2004年

7 田晓滨;孙立;杨述华;;克隆并构建人骨形成蛋白-2真核表达载体[A];2006年贵州省医学会骨科学分会学术年会论文汇编[C];2006年

8 张灿;鞠吉雨;冯永堂;李在连;;乙肝病毒反义X基因真核表达载体的构建[A];山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会论文汇编[C];2001年

9 林英;郑建秋;刘平;葛红岩;侯丽丽;吕锋;金迪;马洪梅;付晓玻;;缝隙连接蛋白50真核表达载体的构建与表达[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年

10 李刚;王平;;人膀胱逼尿肌中肾上腺素能β_2受体基因的克隆及反义真核表达载体的构建[A];全面建设小康社会：中国科技工作者的历史责任——中国科协2003年学术年会论文集（下）[C];2003年

中国重要报纸全文数据库 前2条

1 张中桥;可诱导性真核表达载体构建成功[N];中国医药报;2004年

2 ;1.3倍乙型肝炎病毒全基因真核表达载体的构建及在HepG2细胞中的表达[N];中国医药报;2003年

中国博士学位论文全文数据库 前4条

1 张守纯;p16真核表达载体的构建及其转基因的研究[D];中国医科大学;2004年

2 王小芳;重组肾上腺髓质素真核表达载体的构建及实验研究[D];复旦大学;2004年

3 张越;SLC34A2基因真核表达载体的构建及其转染人肺泡上皮细胞的实验研究[D];吉林大学;2008年

4 杜德伟;丙型肝炎病毒的受体研究——B族Ⅰ型清道夫受体介导HCV入胞作用的研究[D];第四军医大学;2004年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 廖新华;Neuritin转基因小鼠的构建与鉴定[D];石河子大学;2015年

2 m景军;传染性法氏囊病病毒VP4和VP5蛋白基因真核表达载体的构建、表达及对Ⅰ型干扰素信号通路的影响[D];南京农业大学;2014年

3 姜晨霞;mInsB_(15-23)H-2K~d-SCT真核表达载体对NOD小鼠T淋巴细胞亚群的影响[D];扬州大学;2015年

4 辛莉;CRMP-1-phrGFP II-N真核表达载体的构建及其对突起生长的调节[D];暨南大学;2007年

5 吕婷婷;pHsa-miR16-shRNA真核表达载体的构建、体外转录及其活性的鉴定[D];华中科技大学;2009年

6 王艳芳;慢性粒细胞白血病bcr/abl cDNA克隆及真核表达载体的构建[D];山西医科大学;2006年

7 张志武;CD80-pIRES-SART3真核表达载体的构建[D];华中科技大学;2011年

8 王圆圆;CRMP-5-pEGFP-C2真核表达载体的构建及促神经元突起生长作用[D];暨南大学;2009年

9 周梦云;组织基质金属蛋白酶抑制剂-4真核表达载体的构建和功能研究[D];苏州大学;2007年

10 朱晓西;pIRES2-EGFP-hIL-12-HSP70真核表达载体的构建及对7402肝癌细胞生长的影响[D];遵义医学院;2011年

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