体外斑点杂交筛选靶向多重耐药鲍曼不动杆菌高效反义核酸序列实验研究

发布时间：2017-11-13 11:40

  本文关键词：体外斑点杂交筛选靶向多重耐药鲍曼不动杆菌高效反义核酸序列实验研究

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【摘要】：目的体外斑点杂交实验模拟体内环境验证计算机辅助软件设计的反义寡核苷酸序列的活性。方法采用计算机辅助软件对多重耐药鲍曼不动杆菌生长必须基因gyrA的mRNA进行二级结构分析计算,设计出10条反义寡核苷酸序列,合成探针与体外转录并用地高辛标记的gyrA mRNA进行斑点杂交,分别选择一条杂交信号最强和一条杂交信号弱的探针序列合成连接穿膜肽序列的肽-肽核酸,以不同浓度的肽-肽核酸处理鲍曼不动杆菌标准株ATCC19606和多重耐药株,测定经不同浓度PPNA处理的细菌光密度A600值并进行平板菌落计数,观察其对细菌生长的抑制作用。以20μmol/L杂交信号强的肽-肽核酸作用于铜绿假单胞菌,测细菌光密度A600值,观察其对细菌生长的抑制作用。结果杂交信号强的肽-肽核酸对多重耐药的鲍曼不动杆菌和ATCC19606均有明显的体外抗菌活性,其最低抑菌浓度分别为5与10μmol/L,10μmol/L浓度时对两种细菌均具有杀菌活性,而杂交信号弱的肽-肽核酸对细菌的生长无抑制作用,即使将其浓度增加到20μmol/L。杂交信号强的肽-肽核酸对铜绿假单胞菌无生长抑制作用。结论体外斑点杂交实验能够验证计算机软件预测设计的具有特异性的反义核酸的活性,为体外可靠、快速、高通量筛选高效反义序列提供了一种有效的方法,并且为筛选所有基因高效反义序列搭建了一个平台。
【作者单位】： 重庆医科大学附属第一医院检验科;重庆市中山医院检验科;
【基金】：国家自然科学基金面上项目(81071400) 重庆市自然科学基金面上项目(CSTC2010BB5343) 国家临床重点专科建设项目经费资助([2010]305)
【分类号】：R378
【正文快照】： 鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumannii,Ab)广泛分布于自然环境和医院环境中,是最常见的条件致病菌之一。特别是在重症监护室(ICU),已成为一个重要的病原体[1]。近年来多重耐药(multidrug-resistant,MDR)甚至泛耐药(pan-resistant,PDR)鲍曼不动杆菌的不断出现,并在全球多个国家

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