人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白的表达及生物活性分析

发布时间：2017-11-14 16:29

  本文关键词：人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白的表达及生物活性分析

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【摘要】：目的构建携带人肿瘤坏死因子受体(TNFR)胞外区融合人IgG Fc片段的重组腺相关病毒载体(pAAV/hTNFR-Fc),并对融合蛋白hTNFR-Fc的表达和生物学活性进行鉴定。方法构建hTNFR-Fc融合基因重组腺相关病毒(AAV)载体,体外转染人胚肾HEK293T细胞,收集转染上清,以Western blot法检测目的蛋白的表达,应用L929细胞测定重组表达产物对人和大鼠TNF-α细胞毒中和活性,采用ELISA比较重组表达产物对人和大鼠TNF-α的结合活性。结果成功构建重组表达载体pAAV/hTNFR-Fc,在转染细胞上清中检测到目的蛋白hTNFR-Fc的表达,重组表达产物可有效结合人TNF-α并中和其L929细胞毒活性,并对大鼠TNF-α具有一定程度的结合和中和活性。结论成功构建了hTNFR-Fc融合基因,验证了其在AAV载体上的分泌性表达,并对其生物活性进行了鉴定,为进一步病毒包装和大鼠关节炎动物实验研究奠定了基础。
【作者单位】： 军事医学科学院基础医学研究所转化医学研究室;
【基金】：北京市自然科学基金资助项目(7132145)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节滑膜炎为主要病理特征的慢性自身免疫病,多种促炎因素导致关节滑膜组织异常增生,并可造成关节软骨和骨的破坏[1-2]。在RA发病机制中,肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)被认为是最重要的促炎细胞因子之一,可

【参考文献】

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本文编号：1186173