ILK siRNA对高糖刺激的人肾小管上皮细胞GSK-3β及β-catenin表达的影响

发布时间：2017-11-19 10:24

  本文关键词：ILK siRNA对高糖刺激的人肾小管上皮细胞GSK-3β及β-catenin表达的影响

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【摘要】：目的:探讨高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中整合素连接激酶小干扰RNA(ILK siRNA)对糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)磷酸化和β-连环蛋白(β-catenin)核内表达的影响及意义。方法:体外培养人近端肾小管上皮细胞系HKC,分为正常对照组(NG)、高糖组(HG)、高糖+阴性转染对照组(HG+HK)和高糖+ILK siRNA组(HG+ILK siRNA)。倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达。RT-PCR及Western blotting检测ILK mRNA及蛋白表达水平;免疫细胞化学检测磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)和β-catenin表达。Western blotting检测总GSK-3β、pGSK-3β、核β-catenin、总β-catenin、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平。结果:(1)倒置荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达,证实构建的siRNA重组质粒成功转染HKC细胞;(2)与HG和HG+HK组相比,HG+ILK siRNA组ILK mRNA及蛋白水平下降,但较NG组表达仍高;(3)HG+ILK siRNA组ILK基因沉默后,p-GSK-3β与核β-catenin蛋白表达较HG及HG+HK组均下降,但较NG组表达仍高。而总GSK-3β与总β-catenin在各组表达无明显差异。结论:ILK、GSK-3β和β-catenin可能参与了高糖介导的肾小管上皮细胞转分化过程。ILK可能通过调节Wnt/β-catenin途径下游效应蛋白GSK-3β和β-catenin的表达而促使肾小管上皮细胞转分化。
【作者单位】： 河北医科大学第二医院肾内科;河北医科大学病理教研室;
【基金】：河北省卫生厅课题(No.08282)
【分类号】：R363
【正文快照】： 近年研究发现肾小管间质纤维化程度与糖尿病肾病肾功能下降密切相关[1]。肾小管上皮细胞转分化是肾小管间质纤维化的重要因素。整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)是肾小管间质损伤及纤维化最强诱导因子之一[2]。有关肿瘤研究表明ILK可通过抑制糖原合成酶激酶3β(gly

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本文编号：1203247