大鼠腔前卵泡体外培养方法的建立

发布时间：2017-11-20 11:26

  本文关键词：大鼠腔前卵泡体外培养方法的建立

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【摘要】：目的建立大鼠腔前卵泡的体外培养方法。方法取性未成熟大鼠的卵巢,按照酶消化-机械结合法分离腔前卵泡,然后采用动态氧气法(初始孵育时氧气压力为4%,以后每隔24 h氧气压力增加1%,直至最后的氧气压力为11%)、向培养基中添加维生素C(VC)进行培养,观察获得的卵泡数量、形态,及对卵泡发育、激素生成、卵子发生的影响;并将体外卵母细胞的成熟情况与体内卵母细胞的生长情况进行比较,以判断体外培养方法是否成功。结果酶消化-机械结合法及培养体系可获得大量基底膜完整的腔前卵泡;卵泡和卵母细胞直径显著增加,卵泡存活率91.14%、有腔卵泡形成率25.82%、卵丘细胞-卵母细胞复合体(COCs)排出率38.38%;体外培养卵泡分泌雌二醇(E2)和孕酮(P)与体内分泌特征一致。结论本实验方法可以获得大量高质量的腔前卵泡,且对卵泡的长期培养发育无明显影响,与大鼠体内卵泡的发育一致。表明本实验成功建立大鼠腔前卵泡的体外培养方法。
【作者单位】： 天津市新药安全评价研究中心;哈励逊国际和平医院;
【基金】：“重大新药创制”科技重大专项“十二五”计划(2012ZX09505001-001)
【分类号】：R321
【正文快照】： 目前,雌性生殖毒性评价主要采用整体动物实验方法(包括Ⅰ段、Ⅱ段、Ⅲ段),但体内实验存在所需动物数量多、周期长、费用高等特点,而且难以揭示化学物质对卵泡生长、激素合成以及卵子成熟等生殖学关键问题。近年来,虽然有关腔前卵泡的体外培养已在小鼠、牛、羊、猪等动物中取得

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 彭夏雨;汪立芹;杨梅;陈童;郭志勤;;抗坏血酸、表皮生长因子和促卵泡素对绵羊卵巢皮质体外培养的影响[J];生物工程学报;2010年06期

2 李海,周虚,高志花,安铁洙;用台盼蓝和荧光染色法评价腔前卵泡的活力[J];中国兽医学报;2003年05期

3 丁婷;罗爱月;杨书红;赖志文;卢运萍;马丁;王世宣;;小鼠腔前卵泡不同分离方法的比较[J];中国现代医学杂志;2010年05期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 赵蕾;林芸秀;江一平;;分离方法对移植卵巢卵泡发育的影响[J];福建医科大学学报;2009年03期

2 苏宁;张清学;;卵泡体外培养的研究进展[J];国外医学(计划生育/生殖健康分册);2006年01期

3 刘文华;孙洁;王公金;徐小波;李朝军;;小鼠卵母细胞第一极体的采集与保存[J];江苏农业学报;2006年01期

4 王公金;刘文华;谭晓东;徐小波;范必勤;赵伟;;小鼠极体重组卵母细胞的体外受精与发育[J];农业生物技术学报;2008年01期

5 何宇;;抗氧化剂对小鼠腔前卵泡及其卵母细胞体外发育的影响研究[J];河南科学;2014年07期

6 李倩;崔龙波;赵振军;;不同温度下VC对小鼠卵母细胞排卵后老化的调控作用[J];生物技术通报;2013年10期

7 蒲勇;张运海;章孝荣;;哺乳动物腔前卯泡体外培养研究进展[J];生命科学;2013年11期

8 丁婷;罗爱月;杨书红;赖志文;卢运萍;马丁;王世宣;;小鼠腔前卵泡不同分离方法的比较[J];中国现代医学杂志;2010年05期

9 叶婧;丁婷;杜小芳;杨书红;沈薇;石良艳;罗爱月;王世宣;;不同分离方法对人卵巢颗粒细胞体外培养的影响[J];中国现代医学杂志;2013年17期

10 才仁道尔吉;霍生东;;维生素C对獭兔卵母细胞体外成熟的影响[J];新疆畜牧业;2014年11期

中国博士学位论文全文数据库 前4条

1 阿依木古丽;发情周期不同阶段牦牛子宫中生殖激素受体表达的研究[D];甘肃农业大学;2011年

2 章志国;女性生育力保存方法探索：ICSI周期中未成熟卵母细胞的再利用研究[D];安徽医科大学;2013年

3 张宏馨;维生素E对种母鸡繁殖性能的影响及其机理研究[D];河北农业大学;2013年

4 李倩;抑制第二次减数分裂恢复和氧化应激对小鼠卵母细胞排卵后老化的调控作用[D];山东农业大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 赵红岩;不同添加成分对冻融后人原始卵泡体外培养的研究[D];郑州大学;2010年

2 王爽;大鼠骨髓基质干细胞的分离培养及分化潜能鉴定的实验研究[D];中国医科大学;2004年

3 刘文华;小鼠第一极体重组卵母细胞研究[D];南京师范大学;2006年

4 王建华;小鼠第一极体（PB1）重组卵母细胞去精核孤雌发育研究[D];西南大学;2009年

5 赵蕾;人工培育小鼠MII卵制备胚胎干细胞研究[D];福建医科大学;2009年

6 吕丽;苹果机械伤模型与抗病生理研究[D];浙江工商大学;2012年

7 王红艳;绿豆芽离心损伤生理及抗病性研究[D];浙江工商大学;2013年

8 李少维;从原始卵泡培育MⅡ卵制备胚胎干细胞的可行性研究[D];福建医科大学;2013年

9 蒋丽;血管内皮生长因子对水牛卵母细胞体外受精的影响[D];广西大学;2013年

10 陈晓丽;VC和VE对钼暴露雌鼠生殖功能损伤保护作用的研究[D];河南科技大学;2013年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 周虚,Robert Webb;牛腔前卵泡在体外无血清培养中发育为有腔卵泡[J];中国兽医学报;2002年05期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 李海;牛腔前卵泡无血清体外培养[D];中国人民解放军军需大学;2002年

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李敬来;大鼠异位心脏移植模型的建立及其现状[J];上海实验动物科学;2001年03期

2 任志强,刘运良,刘丽君,王训凡,郭正科;三黄肾康丸治疗大鼠慢性肾衰的实验研究[J];中国药房;2001年01期

3 陈杰,王进海,龚均,汪涛,程鹏;药物干预治疗大鼠混合反流性食管炎的实验研究[J];基础医学与临床;2003年S1期

4 田新红,李伟,李成文,李增富;长期应用卡马西平对大鼠小脑结构与功能影响的实验研究[J];陕西医学杂志;2004年08期

5 马骏,朱书秀,王彦春,甘水咏;电针对帕金森病模型大鼠黑质多巴胺能神经元凋亡的影响[J];上海针灸杂志;2005年10期

6 王冰;王宗仁;江山;潘惠娟;;活血化瘀类中药制剂对海马缺血损伤大鼠学习记忆的影响[J];中国临床康复;2005年48期

7 徐勤;沈逸萍;许安丽;罗振亮;;SD大鼠及beagle犬肾上腺组织形态计量分析[J];中国比较医学杂志;2006年07期

8 栗志远;陆国才;袁伯俊;姜华;戴益民;佘佳红;黄矛;;西那沙星对幼龄大鼠的软骨毒性[J];中国新药杂志;2006年04期

9 商常发;赵芝刚;顾有方;陈会良;李卫民;董策龙;;大枣多糖对大鼠血清钙和葡萄糖水平的影响[J];中国中医药科技;2007年02期

10 王毅;林伟;施举红;;野百合碱处理大鼠的血清对大鼠肺动脉压的影响[J];中国临床医学;2008年02期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 陈柏年;高梅;时丽丽;张恒艾;杜冠华;;匹诺塞林对大鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用[A];中国药理学会第十次全国学术会议专刊[C];2009年

2 朱萱萱;王广基;刘建平;王淑云;徐轩;;口腔膜治疗实验性大鼠口腔膜溃疡的研究[A];中国制药工业药理学会20周年学术会议论文集[C];2002年

3 戴文鑫;吴智勇;;慢性阻塞性肺疾病大鼠模型血清胰岛素样生长因子-Ⅰ的变化[A];中华医学会第八次全国老年医学学术会议论文汇编[C];2007年

4 邝素娟;邓春玉;张光燕;饶芳;单志新;林秋雄;杨敏;余细勇;钱卫民;吴书林;;大蒜素对大鼠微血管张力的影响[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年

5 王劲;柳启沛;黄宗枝;;几种不同钙化合物对大鼠铝、铅代谢的影响(摘录)[A];营养健康新观察（第三十八期）：营养因素与骨髓健康[C];2009年

6 胡翔;王静;;雌性大鼠去势造模中设立假手术对照的必要性探讨[A];全国第八次中医妇科学术研讨会论文汇编[C];2008年

7 齐伟;曾薇;庞琦;郭艳红;牟娇;冯兵;刘理;叶自林;袁发焕;;蛋白酶体抑制剂对大鼠糖尿病肾病的治疗作用[A];第十一届全国中西医结合肾脏病学术会议论文汇编[C];2010年

8 梁锐;王军波;;核苷酸喂养大鼠的安全性评价[A];北京市营养学会第四届会员代表大会暨膳食与健康研讨会论文集[C];2010年

9 林小琪;;SD大鼠灌胃百可利30天反复给药毒性试验[A];中国毒理学会第三届中青年学者科技论坛暨2011年全国前列腺药理毒理学研讨会论文集[C];2011年

10 王曦;牛欣;罗致诚;;增龄与雄性大鼠氮氧化物及血清性激素水平变化的关系[A];全国中医药科研与教学改革研讨会论文集[C];2002年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 记者 冯卫东;大鼠研究显示孕期压力或可代代相传[N];科技日报;2014年

2 奇 云;解读大鼠基因有助人类攻克疑难病症[N];大众科技报;2004年

3 张天行;克隆大鼠意义重大[N];中国医药报;2003年

4 本报特约撰稿人 陆志城;用大鼠还是用小鼠？[N];医药经济报;2004年

5 记者 蓝建中;日本研究:骨髓移植使大鼠血管“返老还童”[N];新华每日电讯;2010年

6 记者 姜澎;聪明大鼠 解密大脑记忆功能[N];文汇报;2009年

7 万姗姗　记者 王春;转基因“聪明大鼠”学得快记得牢[N];科技日报;2009年

8 记者 曹继军 颜维琦 通讯员 孙国根;大鼠基因功能图谱被成功绘制[N];光明日报;2014年

9 记者 白毅 通讯员 孙国根;大鼠基因功能图谱绘制成功[N];中国医药报;2014年

10 记者 孙国根;将大鼠基因的功能“对号入座”[N];健康报;2014年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 付德明;氯沙坦对慢性心力衰竭大鼠β_1肾上腺素能受体信号转导通路与心功能的调节及其机制研究[D];山西医科大学;2009年

2 杨少兵;N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基镇痛疫苗应用于大鼠的安全性评价[D];华中科技大学;2009年

3 盖建芳;低出生体重对大鼠肾脏和血压的影响及机制研究[D];中南大学;2009年

4 史敏;慢性间歇性低压低氧抗大鼠胶原诱导性关节炎作用及其免疫学机制[D];河北医科大学;2011年

5 安平;柴夏煎对甲亢大鼠的影响及作用机理研究[D];黑龙江中医药大学;2005年

6 周宜;从大鼠性周期的分子变化探讨柴胡止血液的作用[D];成都中医药大学;2005年

7 张庆红;白细胞介素2和雌激素受体在大鼠垂体前叶的相互关系研究[D];第四军医大学;2000年

8 张海峰;骨髓间充质干细胞移植对大鼠急性肝功能衰竭治疗作用的实验研究[D];山东大学;2007年

9 常薪霞;盐酸小檗碱对高脂饮食诱导的SD大鼠非酒精性脂肪肝的疗效及机制研究[D];复旦大学;2010年

10 顼红雨;早期应激对海马学习、记忆功能的作用和机制研究[D];第三军医大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 李宁;铅、镉、铬、汞对大鼠听力的损伤及铜、锰、锌、硒的保护作用研究[D];山东大学;2008年

2 王莹;慢性肾衰竭大鼠全段甲状旁腺激素与心肌肌钙蛋白的相关性分析[D];山西医科大学;2008年

3 邓旭辉;养精种子汤对缺氧雄性大鼠生殖机能的影响[D];第三军医大学;2008年

4 夏长青;活血降脂灵对早期动脉粥样硬化大鼠的抗氧化应激作用研究[D];河北医科大学;2009年

5 王海燕;运动对SD大鼠与GK大鼠骨骼肌中COUP-TF Ⅰ与COUP-TFⅡ基因表达的影响[D];华东师范大学;2010年

6 吉星;知母提取物的成分分析及对T2DM大鼠干预代谢组学初探[D];广东药学院;2010年

7 曾志;促红细胞生成素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经保护作用的研究[D];暨南大学;2011年

8 汪春彦;金荞麦对克雷伯杆菌肺炎大鼠的保护作用及其机制[D];安徽医科大学;2011年

9 王媛媛;胡芦巴总皂苷对大鼠脂肪肝的预防作用[D];新疆医科大学;2005年

10 徐莉;康复训练对脑梗死大鼠大脑可塑性机制的研究[D];第四军医大学;2002年

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本文编号：1206983