Ficolin 3的表达、纯化及其对RAW264.7巨噬细胞的活化作用

发布时间：2017-11-25 05:20

  本文关键词：Ficolin 3的表达、纯化及其对RAW264.7巨噬细胞的活化作用

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【摘要】：目的构建人ficolin-3基因的原核表达载体在大肠杆菌中表达后纯化,检测可溶性His-ficolin在诱导巨噬细胞系RAW264.7活化中的作用。方法从人外周血单个核细胞cDNA中扩增人ficolin-3基因的cDNA序列,将其插入pET22原核表达载体中,酶切鉴定并测序验证重组质粒pET22b-ficolin 3后,在大肠杆菌BL21中诱导表达并纯化His-ficolin 3。以His蛋白为对照,利用流式细胞术检测不同浓度可溶性His-ficolin 3对RAW264.7细胞吞噬鸡红细胞能力的影响,利用ELISA检测His-ficolin 3对RAW264.7细胞分泌IL-6、IL-12和TNF-α的影响。结果酶切鉴定获得预期目的片段,测序证实重组质粒pET22b-ficolin 3构建成功。SDS-PAGE提示相对分子质量(Mr)33 000处有可溶性目的蛋白His-ficolin 3表达,His柱纯化后产物纯度在90%以上。Western blot法检测证实纯化产物为His-ficolin 3。和His蛋白相比,His-ficolin 3对RAW264.7细胞的吞噬能力具有剂量依赖性,即His-ficolin3浓度越高,吞噬能力越强;此外,His-ficolin3能显著诱导RAW264.7细胞分泌IL-6、IL-12和TNF-α等炎性细胞因子。结论成功构建了pETb-Ficolin 3重组载体并获得了纯度为90%以上的His-ficolin 3。His-ficolin 3能够显著促进巨噬细胞RAW264.7的活化。
【作者单位】： 宁夏人民医院肾内科;宁夏人民医院神经内科;宁夏医科大学总医院放射科;
【基金】：宁夏自然科学基金(NZ11157) 宁夏科技攻关项目(2009032)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种病因未明、侵犯全身结缔组织的自身免疫性疾病,病变累及多系统、多脏器。血浆过滤(filtrationplasmapheresis,FPP)是目前SLE肾损害患者的有效治疗手段之一,能够有效除去血浆中存在的大分子免疫复合物、补体和抗体等致

【参考文献】

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2 郭江涛;王志军;曹旭晴;曹丽;郑亚莉;;系统性红斑狼疮肾炎血清差异蛋白质的筛选[J];细胞与分子免疫学杂志;2011年11期

【共引文献】

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【二级参考文献】

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【相似文献】

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本文编号：1224921