艰难梭菌毒素B受体结合区CDB3融合蛋白诱导表达条件优化及其纯化
本文关键词：艰难梭菌毒素B受体结合区CDB3融合蛋白诱导表达条件优化及其纯化
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【摘要】：目的优化艰难梭菌毒素B受体结合区CDB3融合蛋白诱导表达条件,在获得高表达融合蛋白后对其进行纯化,为艰难梭菌毒素B受体结合区CDB3单克隆抗体的制备奠定基础。方法以诱导前菌液600nm处的光密度值(OD600)、诱导温度、诱导剂异丙基-β-D巯基半乳糖苷(IPTG)浓度和诱导时间为单变量,分别诱导融合蛋白的表达,在此基础上采用正交试验对融合蛋白的诱导表达条件进行优化,通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳半定量分析融合蛋白的表达量及表达形式,以Western blot对融合蛋白进行鉴定,以GST亲和层析柱对融合蛋白进行纯化。结果融合蛋白诱导表达的最佳条件为诱导前菌液OD600 0.8、IPTG浓度0.6mmol/L、诱导时间12h、诱导温度30℃,融合蛋白以可溶性蛋白表达形式为主,经纯化后,融合蛋白纯度超过90%。结论本研究成功优化了艰难梭菌毒素B受体结合区CDB3融合蛋白的诱导表达条件,获得大量表达,并成功对其进行了纯化,为后续单克隆抗体的制备奠定了基础。
【作者单位】： 中南大学湘雅医院检验科;
【基金】：湖南省发改委2013年产业研发项目[湘发改高技(2013)1132号]
【分类号】：R378
【正文快照】： 艰难梭菌是一种革兰阳性厌氧芽孢杆菌,是院内肠道感染的主要致病菌之一[1-2]。近年来,艰难梭菌感染性疾病发病率,尤其是毒素阳性患者检出率有所升高,此类患者的病情通常较为严重,患者病死率较高[3-7]。目前,可用于艰难梭菌检测的方法较多,相对常见是酶联免疫吸附法进行毒素检
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