包被伤寒Vi多糖抗原检测鼠血清中伤寒沙门菌抗体的间接ELISA方法的建立

发布时间：2017-12-04 07:14

  本文关键词：包被伤寒Vi多糖抗原检测鼠血清中伤寒沙门菌抗体的间接ELISA方法的建立

  更多相关文章： 伤寒沙门菌 荚膜多糖 间接酶联免疫吸附试验

【摘要】：目的建立检测伤寒沙门菌(Salmonella typhi)抗体的间接ELISA方法,并进行验证。方法对常规间接ELISA方法进行优化,确定抗原最适包被质量浓度及被检血清最佳稀释度、最适包被温度及时间、包被抗原与血清的最适温度和时间、血清与酶标二抗及封闭的最适温度和时间、酶标二抗最适工作质量浓度,并验证该方法的灵敏度、精密性、特异性及耐用性;用伤寒Vi多糖结合物原液和伤寒Vi多糖衍生物经小鼠大腿内侧皮下免疫,分别于免疫后第14、21、28、35天,经眼眶采全血,分离血清,应用建立的间接ELISA方法检测抗体水平,计算抗体几何平均滴度(GMT)。结果确定了间接ELISA方法最适工作条件:伤寒Vi荚膜多糖抗原最适包被质量浓度为5μg/ml,血清最佳稀释倍数为1∶40;最适包被温度及时间为4℃12 h;包被抗原与血清最适反应温度和时间为37℃2 h;血清与酶标二抗最适反应温度和时间为37℃1 h;封闭液最适封闭温度和时间为室温1 h;HRP标记的羊抗鼠IgG最佳反应浓度为1∶8 000。该方法灵敏度为1∶1 600;孔间和板间CV平均值分别为2.8%和5.8%;与其他血清无交叉反应;pH值、包被时间、包被温度及酶结合时间调整前后,同一样品检测的A450值差异无统计学意义(P0.05)。伤寒Vi多糖与蛋白载体偶联后,免疫原性明显增强,且白喉类毒素(diphtheria toxin DT)和重组铜绿假单胞菌外毒素A(recombinantPseudomonasaeruginosaexotoxinA,rEPA)两种不同载体偶联得到的结合物免疫原性无明显差异。结论成功建立了一种检测伤寒沙门菌抗体的间接ELISA方法,该方法具有较强的特异性、灵敏度及精密性。
【作者单位】： 云南沃森生物技术股份有限公司;
【基金】：云南省科技计划项目(2014BC003)
【分类号】：R392-33;R378.22
【正文快照】： 伤寒是由肠道沙门菌伤寒杆菌引起的以发热为主要表现的一种急性肠道传染病,是一种全球性的公共卫生问题。目前全球每年约有2 200万感染者,导致约22万的死亡病例[1]。伤寒沙门菌(Sal-monella typhi)是一种有强致病力的细菌,半数感染量为105个细菌[2]。20世纪40年代抗生素的出现

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李铁民,徐浩,江崎孝行;单核吞噬细胞应答伤寒沙门菌的实验研究[J];中国公共卫生;2003年01期

2 宋国蓉;黄瑞;;伤寒沙门菌致病物质的研究进展[J];微生物与感染;2007年03期

3 李铁民,徐浩,江崎孝行;伤寒沙门菌Vi抗原作为毒力因子的特性研究[J];中国公共卫生;2002年01期

4 邵荣标,钱绩虎,刘玲;伤寒沙门菌生化特性分析[J];南通医学院学报;2000年03期

5 江滟 ,王和;细胞壁缺陷对伤寒沙门菌苹果酸脱氢酶活性影响的实验观察[J];贵州医药;2001年10期

6 王鸣柳,董柏青,阚飙,李翠云,唐振柱,谭冬梅,权怡,杨进业;广西伤寒沙门菌16s rRNA的基因多态性分析[J];广西预防医学;2002年04期

7 薄志坚,刘丹红,王敏,万强,王秀萍;辽宁地区伤寒沙门菌的扩增片段长度多态性分析[J];中国卫生检验杂志;2005年10期

8 黄瑞,焦e，

本文编号：1250171