Raw264.7细胞向破骨细胞分化诱导培养体系的改良

发布时间：2017-12-04 10:20

  本文关键词：Raw264.7细胞向破骨细胞分化诱导培养体系的改良

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【摘要】：目的:通过改良细胞培养方案建立体外诱导Raw264.7细胞分化形成成熟破骨细胞(OC)的高效培养体系。方法:向Raw264.7细胞培养液α-MEM中添加50μg·L-1 M-CSF、100μg·L-1 RANKL和1×10-8 mol·L-1 1α,25-(OH)2D3,于5%CO2、37℃孵箱中培养12d,每3d换液1次,每次换液前对细胞进行短暂消化。倒置显微镜下观察细胞形态变化,并利用HE染色、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、FITCphalloidin染色和免疫荧光染色鉴定OC是否成熟并具有吞噬功能。结果:通过改良培养方法,在诱导过程中培养孔内的大部分区域始终保持单层细胞的生长状态。镜下观察和HE染色,诱导第12天时OC胞体覆盖培养面积的70%;FITC-phalloidin染色,伴随着OC成熟,伪足内出现的束状伪足小体逐渐变为环形,最终融合带状肌动蛋白环环绕在胞质周围;免疫荧光染色,诱导12d后OC表达的降钙素受体(CTR)较前体细胞显著增加,TRAP染色显示OC胞浆内呈现大量红色颗粒。提示获得的OC成熟并具有吞噬功能。结论:本实验通过改良培养方法,联合应用细胞因子50μg·L-1 M-CSF、100μg·L-1 RANKL和1×10-8 mol·L-1 1α,25-(OH)2D3建立了体外诱导Raw264.7细胞分化形成成熟OC的高效培养体系。
【作者单位】： 四川农业大学食品学院农产品加工及贮藏工程学系;吉林大学第一医院神经外科;吉林大学第一医院儿科;吉林大学基础医学院组织学与胚胎学系;
【基金】：国家自然科学基金资助课题(31101249)
【分类号】：R329
【正文快照】： 健康成人的骨组织处于一种不断更新和重建的状态。骨重建是一个动态过程,包括骨吸收和骨形成[1]。其中行使骨吸收功能的细胞主要是破骨细胞(osteoclast,OC)[2],行使骨形成功能的细胞是成骨细胞(osteoblast,OB)。正常生理条件下两者处于一种动态平衡,如果这种平衡被打破就会发

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本文编号：1250672