猪巨细胞病毒TaqMan荧光定量PCR检测的建立

发布时间：2017-12-15 10:12

  本文关键词：猪巨细胞病毒TaqMan荧光定量PCR检测的建立

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【摘要】：目的建立一种特异、灵敏、快速检测猪巨细胞病毒的TaqMan荧光定量PCR方法。方法根据GenBank已登录的猪巨细胞病毒(Porcine Cytomegalovirus,PCMV)DNA序列设计合成特异性引物对和TaqMan荧光探针,经优化反应条件,建立了猪巨细胞病毒的TaqMan荧光定量PCR检测方法(fluorescent quantitative real-time PCR,FQ-PCR),进行了FQPCR检测方法的敏感性、特异性和重复性试验;对疑似PCMV感染临床样品进行了应用检测,并与常规PCR方法进行了比对;对FQ-PCR检测结果为PCMV阳性猪的不同内脏器官进行病毒含量比较检测。结果成功建立了PCMV的FQ-PCR方法,标准曲线的循环阈值(Ct值)与模板浓度有良好的线性关系,相关系数为0.998;检测灵敏度可达1拷贝/μL,是常规PCR的100倍;特异性高,对pGEM-T/PCMV重组质粒扩增呈现阳性反应曲线,而对6个对照病原的扩增曲线均呈现阴性反应;对不同浓度的pGEM-T/PCMV重组质粒分别重复扩增6次,重复结果良好;对15份临床疑似PCMV感染的组织病料进行应用检测表明,其中有9份样品为阳性,与常规PCR方法检测的阳性符合率为100%。猪的内脏器管中PCMV含量最高为扁桃体,最低的为小肠。结论成功建立了PCMV FQ-PCR方法,可用于临床上PCMV感染猪的确诊和隐性感染猪的早期检测,对PCMV的快速诊断、综合防控及净化等具有重要意义。
【作者单位】： 中国农业大学动物医学院;周口市畜禽改良站;河南省动物疫病预防控制中心;郑州市中心医院消毒供应中心;
【基金】：河南省科技创新人才计划项目(No.2011-1)资助~~
【分类号】：R373
【正文快照】： 巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)是一类在自然界普遍存在而又有严格种属特异性的病毒,属β疱疹病毒亚科,致猪发病的为猪巨细胞病毒(Porcine Cytomegalovirus,PCMV),是一种条件性传染病。该病毒首次从英格兰分离,是继伪狂犬病毒之后发现的第2个猪疱疹病毒[1]。患猪特征性临诊

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 刘红亮;朱玲;徐志文;王燕群;魏浩澈;郭万柱;赵玲;;猪巨细胞病毒PCR检测方法的建立及应用[J];动物医学进展;2011年07期

2 闫若潜;安春霞;刘淑敏;赵雪丽;郭小玲;赵明军;吴志明;;猪传染性胃肠炎与流行性腹泻病毒二重RT-PCR检测方法的建立及应用[J];中国畜牧兽医;2012年09期

3 宋志军;宋长绪;杨增岐;朱道中;武占银;蒋智勇;林志雄;刘燕玲;张福良;;猪生殖与呼吸综合征病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J];中国兽医科学;2006年02期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 乌娜尔汗·金斯汗;海拉提江·赛提汗;;PRRSV致病机制及其相关检测技术研究进展[J];山东畜牧兽医;2010年03期

2 王劭;胡奇林;程晓霞;林锋强;欧阳岁东;朱小丽;;猪繁殖与呼吸综合征病毒检测技术研究进展[J];动物医学进展;2006年S1期

3 郭杨;陈世界;郭万柱;李t，

本文编号：1291581