施马伦贝格病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及其特性分析

发布时间：2017-12-15 11:27

  本文关键词：施马伦贝格病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及其特性分析

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【摘要】：目的制备施马伦贝格病毒(SBV)核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(mAb)并分析其特性。方法将SBV N基因分别构建至pET-28a-c(+)和pMAL-c5X载体中,在大肠杆菌中诱导表达带组氨酸标签的融合蛋白His-SBV-N和带麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的融合蛋白MBP-SBV-N,分别用镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)树脂和直链淀粉树脂纯化两种蛋白;用纯化的His-SBVN免疫BALB/c小鼠制备mAb,以MBP-SBV-N为包被抗原间接ELISA筛选分泌mAb的杂交瘤细胞和测定mAb效价,利用蛋白G琼脂糖凝胶从腹水中纯化mAb;应用Western blot和间接免疫荧光分析mAb的反应性和特异性。结果筛选并纯化出1株抗SBV的mAb(命名为1F2),效价为1∶32 000,重链亚型为IgG2α,轻链为κ;1F2既能与重组SBV N蛋白发生反应,又能识别SBV,但与布尼亚病毒科内亲缘关系较近的沙门达病毒、道格拉斯病毒和赤羽病病毒的N蛋白存在交叉反应,而与裂谷热病毒N蛋白无交叉反应。结论成功制备了抗SBV核衣壳蛋白的mAb,为SBV的血清学检测提供了工具。
【作者单位】： 中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所;德国弗里德里希洛弗勒研究所;
【基金】：“十二五”国家科技支撑计划课题(2013BAD12B01) 国家质检总局科技计划项目(2013IK054) 中国检验检疫科学研究院基本科研业务费专项资金(2012JK011)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 施马伦贝格病是一种新发的虫媒性动物传染病[1-2]。2011年11月,德国弗里德里希洛弗勒研究所(Friedrich-Loeffler-Institut,FLI)的科研人员首次证实该病的病原体为一种新型布尼亚病毒,并根据病毒分离地名将其命名为施马伦贝格病毒(Schmallenbergvirus,SBV)[1]。SBV主要感染绵

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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4 景宏丽;王静波;曹欢;林祥梅;;病毒性出血性败血症病毒单克隆抗体的制备及其特性分析[J];细胞与分子免疫学杂志;2013年04期

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【共引文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 张永宁;吴绍强;吕继洲;冯春燕;王彩霞;袁向芬;邓俊花;林祥梅;Wernike Kerstin;;施马伦贝格病毒核衣壳蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备[J];畜牧兽医学报;2013年10期

【二级参考文献】

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【相似文献】

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6 王淑杰;蔡雪辉;刘永刚;吴国军;刘狄，

本文编号：1291814