荧光素酶标记的HBV细胞模型的建立

发布时间：2017-12-15 12:04

  本文关键词：荧光素酶标记的HBV细胞模型的建立

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【摘要】：建立萤火虫荧光素酶(Fluc)为报告基因标记的乙型肝炎病毒(HBV)体外感染的细胞模型。利用分子亚克隆技术,以pAAV/1.2HBV质粒为模板,PCR扩增带有反向重复序列(ITR)的1.2倍HBV基因组片段,反向插入真核表达载体pGL3-CP-Fluc中,构建Fluc标记的HBV基因组表达质粒pGL3-CP-Fluc-HBV1.2,并将此质粒转染至Huh-7细胞中。全自动免疫分析仪进行HBsAg、HBeAg的定量检测,生物发光检测仪检测Fluc其在细胞的表达水平。成功构建了1.2倍HBV全基因真核表达载体,稳定转染Huh-7细胞后,质粒在细胞中高水平表达Fluc,并可以正常分泌HBsAg、HlBeAg。重组质粒pGL3-CP-Fluc-HBV1.2能在Huh-7细胞中表达,其稳定转染的细胞可作为一种新型的HBV体外感染模型,为抗病毒药物研究奠定基础。
【作者单位】： 中国人民解放军第一七五医院;厦门大学附属东南医院检验科;
【基金】：国家自然科学基金项目(81102223) 南军军区医药卫生科研基金项目(12MA068)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的感染严重影响着人类的健康,它能够引起急、慢性病毒性肝炎。急性感染后,有5%?10%的成年人发展为持续感染,最终可以导致慢性肝炎、肝硬化和肝癌。迄今为止,还无有效的药物能够完全治愈乙肝患者。由于HBV具有严格的宿主特异性,不能在体外

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本文编号：1291868