原代小鼠肝脏细胞的高效分离纯化与培养

发布时间：2017-12-17 02:07

  本文关键词：原代小鼠肝脏细胞的高效分离纯化与培养

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【摘要】：目的:建立一种能稳定获得高活力和高纯度原代小鼠肝脏细胞的分离、纯化及培养方法。方法:应用改良的Seglen二步法原位灌注和机械离心分离肝脏细胞,并用改良的高糖DMEM培养基进行培养。台盼蓝拒染法检测接种时肝脏细胞的存活率,倒置显微镜动态观察肝脏细胞形态变化,应用免疫荧光技术对肝脏细胞进行Albumin染色。结果:每只小鼠可获取肝脏细胞的总产量平均为1.35×106/g体重,肝脏细胞存活率90%。倒置显微镜下观察贴壁前肝细胞直径为35.14μm±4.35μm,肝脏细胞在接种后3 h基本完成贴壁;肝脏细胞接种后24h,所有肝脏细胞均强阳性表达成熟肝脏细胞标志物Albumin,肝细胞纯度95%。结论:改良的分离纯化及培养方法能稳定获得高产量、高活率及高纯度的小鼠肝脏细胞。
【作者单位】： 复旦大学附属中山医院普外科;
【基金】：上海市科学技术委员会基金项目(09ZR1405900)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 前言肝脏是机体最重要的器官之一[1],肝细胞具有丰富的酶系及多种特异性功能[2]。体外分离和培养的肝细胞被广泛用于病理学、药代动力学、毒理学和致癌作用等基础实验研究[3-5],并且肝细胞移植对于急性肝功能衰竭、肝硬化等是一种具有巨大潜力的治疗方式[6-8]。与其他动物相比

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 徐哲;肝细胞原代培养的常用添加物[J];国外医学(流行病学传染病学分册);2002年06期

2 刘禹;兰海楠;李维;杨艳红;付志玲;马思慧;吴天成;郭风;赵雪;张辉;崔焕忠;吴e，

本文编号：1298322