Wnt3a对小鼠胚胎干细胞心肌细胞分化的影响

发布时间：2017-12-19 01:28

  本文关键词：Wnt3a对小鼠胚胎干细胞心肌细胞分化的影响

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【摘要】：目的:观察Wnt3a信号对小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)心肌细胞分化的影响。方法:用悬滴培养法促进ESCs形成拟胚体(embryoid bodies,EBs)。用免疫荧光染色法检测心肌特异性蛋白cTnT的表达。在不同分化时间加入Wnt3a及Wnt信号通路抑制剂Dkk-1观察对搏动EBs百分率的影响。用RT-PCR检测Nk同源异型盒5(Nkx2.5)、锌指转录因子-4(GATA-4)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)及心房钠尿肽(ANP)基因表达水平的变化。用Western blot检测cTnT表达水平的变化。将不加入Wnt3a,分化第0~5天及5~10天加入Wnt3a的组分别命名为对照组,D0-5组及D5-10组。加入Dkk-1的组命名为Dkk-1组。结果:通过悬滴培养法形成的EBs能够出现自发性搏动并且有TnT表达。EBs形成过程中即分化第0~5天加入Wnt3a与对照组相比具有更高的搏动EBs百分率,Nkx2.5、GATA4、β-MHC和ANP基因表达的水平,以及cTnT蛋白表达水平,而EBs形成后即分化第5~10天加入Wnt3a的结果相反。分化第5~10天加入Dkk-1与对照组相比具有更高的搏动EBs百分率及cTnT蛋白表达水平,并且在分化第0~5天分别加入Wnt3a及Dkk-1与单独加入Wnt3a及Dkk-1相比,搏动EBs百分率及cTnT蛋白表达水平更高。结论:Wnt3a对ESCs向心肌细胞分化的调控呈时间依耐性,EBs形成过程中激活Wnt3a信号及EBs形成后阻断Wnt3a信号能够获得更多的心肌细胞。
【作者单位】： 武汉大学中南医院心内科;南方医科大学神经生物学教研室;
【基金】：国家自然科学基金项目资助(81200119) 中央高校基本科研业务费专项资金资助(121007)
【分类号】：R329.1
【正文快照】： 胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)通过形成拟胚体(embryoid bodies,EBs)可分化成3个胚层的多种细胞,其中包括中胚层的心肌细胞[1]。ESCs源性心肌细胞可用于心脏发育或作为移植细胞用于治疗心脏疾病方面的研究,但因其分化程度有限限制了其应用[2]。通过一些因子调控ESCs

【共引文献】

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本文编号：1306393