产气荚膜梭菌α毒素的原核表达及纯化

发布时间：2017-12-24 09:24

  本文关键词：产气荚膜梭菌α毒素的原核表达及纯化　出处：《中国生物制品学杂志》2014年10期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的克隆产气荚膜梭菌α毒素(Clostridium perfringens alpha-toxin,CPA)全基因,在大肠埃希菌(E.coli)中表达并纯化α毒素。方法设计并合成CPA的全基因,插入原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28aCPA,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,优化表达条件,并对重组蛋白进行纯化。结果双酶切和测序鉴定结果表明,CPA基因以正确的阅读框架克隆入pET-28a载体中;表达的重组蛋白相对分子质量约为43 000,主要以可溶性形式表达,最佳培养基为TB培养基,最佳诱导温度为37℃,诱导时间为3 h;纯化的重组蛋白纯度达95%以上,浓度为0.663 mg/ml,收率为5 mg/g湿菌。结论成功在E.coli中表达了CPA,纯化后的CPA纯度较高,为进一步研究其结构、功能、致病机制及制备抗α毒素人源单链抗体奠定了基础。
【作者单位】： 吉林农业大学食品科学与工程学院;军事医学科学院军事兽医研究所;吉林省人兽共患预防与控制重点实验室省部共建重点实验室;
【分类号】：R378
【正文快照】： 产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)亦称魏氏梭菌(C.welchii),为革兰阳性菌,专性厌氧,是引起人食物中毒、气性坏疽、抗生素相关性腹泻以及动物肠毒血症和痢疾等疾病的主要病原菌[1]。目前已发现的外毒素至少有16种,但仅α、β、ε、ι毒素以及产气荚膜梭菌溶素O、肠毒素、

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：1327813