幽门螺杆菌napA基因的克隆表达和免疫原性的初步研究
本文关键词：幽门螺杆菌napA基因的克隆表达和免疫原性的初步研究 出处：《中国协和医科大学》2007年硕士论文 论文类型：学位论文
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【摘要】： 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，H．pylori，Hp)是一种微需氧革兰氏阴性螺旋杆菌，在全球人口中的感染率超过50％。H．pylori感染是慢性胃炎和消化性溃疡的主要病因，与胃癌、胃粘膜相关性淋巴样组织(Mucosa-associated lymphoid tissue，MALT)淋巴瘤的发生密切相关，被WHO确定为Ⅰ类致癌因子。研制疫苗将是控制H．pylori感染及相关疾病经济有效的途径。 幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白(H．pylori neutropphil-activating protein，HP-NAP)位于细菌细胞质中，可通过细菌自溶而释放，并附着在细菌外膜表面，介导了H．pylori与细胞表面的结合。其能够趋化和激活中性粒细胞，导致炎症。而最新实验表明，HP-NAP在酸性条件下，能够结合甚至浓缩DNA，以保护DNA免受宿主环境的损伤。可见，HP-NAP在H．pylori的粘附、定植，以及引起的炎症反应中都起到重要作用，是H．pylori重要的致病因子之一。本实验尝试了采用基因工程的方法获得NAP蛋白，并对其免疫原性进行了初步的研究。 用PCR从标准株Hp 26695基因组中扩增napA基因，并构建原核表达载体pET28a—nap。测序证实克隆片段与GenBank公布序列完全一致。优化表达条件后，pET28a—nap在大肠杆菌中获得大量表达，表达量占菌体蛋白总量的40％。经Chelating．F．F．亲和柱层析Sephacryl S-200分子筛柱层析后，，获得了95％以上纯度的融合蛋白。与佐剂CpG ODN和LTB联合口服免疫小鼠后，可有效诱导免疫应答，产生高水平的IgG，与未加佐剂组相比具有显著性差异。以上结果说明融合蛋白NAP联合佐剂经口服免疫可有效诱导实验动物产生免疫应答，NAP具有良好的免疫原性。 本研究成功构建了融合蛋白表达载体，并获得了高效的表达。摸索了纯化方案，并对融合蛋白的免疫原性进行了初步的研究。为Hp基因工程疫苗的研究和开发打下了一定的基础。
[Abstract]:Helicobacter pylori (H.pylori, Hp) is a micro aerobic gram negative bacillus helix, which has more than 50% in the global population. H.pylori infection is the main cause of chronic gastritis and peptic ulcer. It is closely related to the occurrence of Mucosa-associated lymphoid tissue (MALT) lymphoma and gastric cancer, and is identified as class I carcinogen by WHO. The development of vaccines will be an effective and effective way to control H.pylori infection and related diseases.
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R378
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