我国发现携带插入序列IS1203变种的志贺毒素2基因的大肠杆菌O157：H7

发布时间：2017-12-27 22:21

本文关键词：我国发现携带插入序列IS1203变种的志贺毒素2基因的大肠杆菌O157：H7　出处：《大连医科大学》2005年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：肠出血性大肠杆菌(Enterohaemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157:H7 与出血性肠炎、溶血性尿毒综合征和血小板减少性紫癫这些传染性疾病密切相关。志贺毒素(也称作 Vero 细胞毒素)是大肠杆菌O157:H7 重要的致病性毒力因子,具有强烈的细胞毒性。志贺毒素分为志贺毒素 1 和志贺毒素 2 两大家族,每个家族又可分为众多变种。大肠杆菌 O157:H7 携带的志贺毒素型别与所致人类疾病的发展进程密切相关。我国 1987 年首次从腹泻患者标本中分离到了肠出血性大肠杆菌 O157:H7,1999 年和 2000 年在苏、皖两省发生了肠出血性大肠杆菌O157:H7 引起的暴发,期间又从部分地区的环境及动物中陆续分离到肠出血性大肠杆菌 O157:H7。我国肠出血性大肠杆菌 O157:H7 的流行情况值得重要关注和更多研究。为了探索我国肠出血性大肠杆菌 O157:H7 感染的流行病学情况,我们采用了聚和酶链反应、核苷酸序列测定等方法,对 1992-2002 年我国部分地区(主要是曾经暴发过 O157:H7 感染的苏、皖两省)分离到的 289 株产志贺毒素的大肠杆菌 O157:H7 所携带的志贺毒素基因型别进行了分析。我们发现了一种新型的志贺毒素 2 基因存在于 3 株大肠杆菌 O157:H7 中,其中编号为 02F044 和 99B113 的 2 株大肠杆菌 ·2· O157:H7 均分离自江苏羊粪标本,编号为 9 的 1 株大肠杆菌 O157:H7 分离自安徽猪粪标本。经过核苷酸序列测定和序列比较分析发现,这种新型的志贺毒素 2 基因均有一长度为 1313bp 的插入片段,导致长度为 1241bp 的野生型志贺毒素 2 基因增长为 2554bp。该插入片段包括一长度为 1310bp 的插入序列(insertion sequence,IS)和因插入产生的长度为 3bp 的同向重复序列(direct repeat , DR)。除这段 3bp 的同向重复序列外,这三段长 1310bp 插入序列完全一致,与 1999 年日本报道的插入在志贺毒素2基因中的插入序列1203变种(insertion sequence 1203 variant,IS1203v)(stx2::IS1203v)有 100%的序列同源性。这是首次在我国发现携带 stx2::IS1203v 的大肠杆菌 O157:H7 菌株。此外,IS1203v 在这 3 株菌的志贺毒素 2 基因中的插入位置各不相同,而且其中大肠杆菌 02F044 和 9 的 IS1203v 的开放性读码框与各自 Stx2 A、B 亚单位的开放性读码框方向相反,另一株大肠杆菌 99B113 的 IS1203v 的开放性读码框与 Stx2 A、B 亚单位的开放性读码框方向相同。提示 IS1203v 的插入可能引起志贺毒素 2 的在产量或活性功能的改变。此外,对这 3 株携带 stx2::IS1203v 的大肠杆菌 O157:H7 进行常规方法制备志贺毒素 2 并对其制备的产物进行 HeLa、Vero 细胞毒试验分析,将测定 HeLa、Vero 细胞乳酸脱氢酶释放量做为志贺毒素 2 细胞毒性的一个指示。我们发现这用这 3 株菌的志贺毒素 2 制备产物对 HeLa 和 Vero 细胞均能产生致细胞病变作用的形态学改变。志贺毒素 2 的制备产物对细胞乳酸脱氢酶释放量的结果显示,在 18 小时内,大肠杆菌 02F044、99B113 和 9 志贺毒素 2 的制备产物分别对 HeLa 细胞产生了 25.16%、26.08%、26.07%的乳酸脱氢酶释放量,比仅携带志贺毒素 2 的阳性对照菌株 51.62%的乳酸脱氢酶释放量低;对 Vero 细胞分别为 31.15%、30.31%、31.32%,也低于阳性对照菌株 40.53%的乳酸脱氢酶释放量。提示 IS1203v 的插入对志贺毒素 2 的活性有所影响。经统计学分析显示,3 株菌志贺毒素 2 的制备产物对 HeLa 细胞乳酸脱氢酶释放的值均低于仅携志贺毒素 2 的大肠杆菌 O157:H7 阳性对照菌株 (P0.05);但对 Vero 细胞而言,3 株菌志贺毒素 2 的制备产物的乳酸脱氢酶释放的值与仅携志贺毒素 2 的大肠杆菌 O157:H7 阳性对照菌株
[Abstract]:Enterohemorrhagic Escherichia coli (Enterohaemorrhagic Escherichia coli, EHEC O157:H7) and hemorrhagic enteritis, hemolytic uremic syndrome and thrombocytopenic purpura of these infectious diseases are closely related. Shiga toxin (also known as Vero cytotoxin) is an important pathogenic virulence factor of Escherichia coli O157:H7, which has strong cytotoxicity. Shiga toxin is divided into two families of Shiga toxin 1 and Shiga toxin 2, and each family can be divided into many varieties. The type of Shiga toxin carried by Escherichia coli O157:H7 is closely related to the development of human disease. China in 1987 for the first time from specimens in patients with diarrhea were isolated from enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H71999 and 2000 in Jiangsu and Anhui two province the intestinal Escherichia coli outbreak caused by O157:H7, while from the environment and animal parts in succession in isolated enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7. The prevalence of entero hemorrhagic Escherichia coli O157:H7 in China deserves important attention and more research.
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R378

【引证文献】