腺病毒介导血管内皮生长因子转染脐带间充质干细胞的实验研究

发布时间：2017-12-28 12:33

本文关键词：腺病毒介导血管内皮生长因子转染脐带间充质干细胞的实验研究　出处：《解放军医药杂志》2014年05期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的探讨腺病毒载体介导血管内皮生长因子(VEGF)转染脐带间充质干细胞(UCMSCs)的可行性,以及VEGF转染对UCMSCs功能的影响。方法构建VEGF165-EGFP基因重组腺病毒载体,分离和培养UCMSCs,携增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的腺病毒载体转染UCMSCs,倒置荧光显微镜下观察细胞转染效果,流式细胞仪检测细胞转染率,确定最佳病毒感染复数(MOI)。将细胞分为VEGF-EGFP转染组、EGFP空载组及对照组3组,依据最佳MOI值转染并收集细胞,采用蛋白印迹法(Western blotting)检测VEGF及Akt表达变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测VEGF蛋白表达情况。采用CCK-8法评价转染对UCMSCs增殖的影响。结果腺病毒介导的VEGF165-EGFP基因能够成功转染UCMSCs,且VEGF基因在细胞内能够转录和表达,并能分泌到细胞外。转染后48 h VEGF-EGFP转染组VEGF、Akt水平显著高于EGFP空载组和对照组(P0.05);转染后48 h采用ELISA法在VEGF-EGFP转染组细胞培养上清中即检测到VEGF的表达和分泌,在转染后第4天达到高峰,且VEGF表达显著高于EGFP空载组及对照组(P0.01),以后逐渐下降,并稳定表达一定时间。CCK-8法检测结果显示,介导VEGF基因转染的腺病毒对UCMSCs增殖无明显影响。结论腺病毒介导VEGF基因能够成功转染UCMSCs,保持其原有生物学特性,并能持续高效表达VEGF,为通过VEGF基因联合UCMSCs治疗获得糖尿病下肢血液循环重建的可行性提供理论依据。
[Abstract]:Objective to investigate the feasibility of transfection of umbilical cord mesenchymal stem cells (UCMSCs) by adenovirus vector mediated vascular endothelial growth factor (VEGF) and the effect of VEGF transfection on UCMSCs function. Methods the recombinant adenovirus vector containing VEGF165-EGFP gene, isolated and cultured UCMSCs with enhanced green fluorescent protein (EGFP) recombinant adenovirus vector was transfected into UCMSCs cells, observe the transfection effect under inverted fluorescence microscope, the transfection efficiency was detected by flow cytometry, determine the best virus (MOI) infection. The cells were divided into 3 groups: VEGF-EGFP transfection group, EGFP no load group and control group. The cells were transfected and collected according to the best MOI value, and the expression of VEGF and Akt were detected by Western blot (Western blotting). The expression of VEGF protein was detected by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The effect of transfection on the proliferation of UCMSCs was evaluated by CCK-8 method. Results the adenovirus mediated VEGF165-EGFP gene can be successfully transfected into UCMSCs, and the VEGF gene can be transcribed and expressed in the cell, and can be secreted out of the cell. 48 h VEGF-EGFP VEGF transfection group and Akt levels after transfection was significantly higher than that of EGFP load group and the control group (P0.05); 48 h after transfection by ELISA assay in culture supernatant was detected that the expression and secretion of VEGF in VEGF-EGFP transfected cells, reached a peak in the fourth day after transfection, and the expression of VEGF was significantly higher than that of EGFP vector group and the control group (P0.01), then gradually decreased, and stable expression of a certain period of time. The results of CCK-8 assay showed that the adenovirus mediated VEGF gene transfection had no significant effect on the proliferation of UCMSCs. Conclusion adenovirus mediated VEGF gene can be successfully transfected into UCMSCs, maintaining its original biological characteristics and expressing VEGF continuously and efficiently. It provides a theoretical basis for the feasibility of VEGF gene combined with UCMSCs in the treatment of diabetic lower limb blood circulation reconstruction.
【作者单位】：解放军白求恩国际和平医院内分泌科;河北省人民医院内分泌科;解放军白求恩国际和平医院输血科;
【基金】：河北省自然科学基金课题(H2013505067)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 研究发现血管内皮细胞生长因子(vascular en-dothelial growth factor,VEGF)能加速侧支循环的建立,在血管新生中起关键作用,但由于VEGF属多肽类生长因子,在体内半衰期短,提纯较为困难,不适合作为药物直接用于临床。高增殖潜能和定向归巢特性使脐带间充质干细胞(umbilical cord

【参考文献】

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【共引文献】

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