SARS-CoV N蛋白和蛇毒去整合素Agkistin-s的表达及功能研究

发布时间：2017-12-28 14:06

  本文关键词：SARS-CoV N蛋白和蛇毒去整合素Agkistin-s的表达及功能研究　出处：《浙江大学》2005年博士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：第一部分,SARS—Cov N基因的表达及功能研究。SARS-CoY是一种具包膜的 单股正链RNA病毒,它是冠状病毒家族中新出现的一个种。SARS—Cov核衣壳体 蛋白N是SARS-Cov的重要的结构蛋白质之一,是在患者血清中抗体含量最多的 蛋白。为了进一步研究N蛋白的功能,我们分别利用原核和真核表达系统表达了 重组的N蛋白,并通过Ni2\~+柱进行了纯化。用纯化的蛋白免疫新西兰大白兔,得 到了效价高、特异性好的多克隆抗血清。 以前研究发现PRRSV、IBV、MHV和TGEV等冠状病毒的N蛋白都定位在细胞 质与核仁中,这可能是冠状病毒的共有特征。序列分析发现SARS-Cov N蛋白基 因中也有一核定位信号序列(KKDKKK,370-376aa)。我们利用制备的多克隆抗 血清,通过杆状病毒表达系统和真核表达系统分别在Tn-581-4和Hela细胞中对 N进行了亚细胞定位。通过共聚焦荧光显微镜在细胞质与核仁中都观察到了表达 的N重组蛋白,因此,SARS-CoY核衣壳体蛋白的亚细胞定位于细胞质与核仁中, 这一现象可能与N蛋白的生物功能有密切联系。 SARS-CoV病毒主要感染肺部组织,通过诱导肺组织细胞凋亡而引起损伤, 细胞凋亡可能在SARS发病中起重要的作用。进一步了解SARS-Cov病毒感染与细 胞凋亡过程所可能涉及的病毒基因将对了解SARS-CoW的致病机制有重要的意 义。定位于细胞核仁的内源蛋白多参与细胞途径的调节,很多病毒通过其病毒基 因编码蛋白诱导或者抑制寄主细胞信号传导途径来参与细胞调节。我们利用Hela 细胞,进一步研究N蛋白在诱导细胞调亡方面的作用,结果发现重组的N蛋白能 够通过capsase途径诱导Hela细胞的调亡。 第二部分,蛇毒去整合素结构域agkistin-s的表达及功能研究。去整合素 (disintegrin)是从蛇毒中分离出含有Arg-G1y-Asp(RGD)或Lys-Gly-Asp(KGD) 结构域的富含半胱氨酸的一群低分子量多肽。去整合素能够通过其RGD三肽拮抗 血管内皮细胞表面的整合素与细胞外基质黏附,并诱发其凋亡,从而抑制血管新 生血管的生长。肿瘤血管生成是肿瘤生长和转移的基础,抗血管的生成能够有效
[Abstract]:The first part is the study of the expression and function of SARS - Cov N gene. SARS-CoY is a coated one
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R373

【参考文献】

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本文编号：1346282