人脐血单个核细胞体外诱导分化为神经元样细胞研究

发布时间：2017-12-30 23:25

  本文关键词：人脐血单个核细胞体外诱导分化为神经元样细胞研究　出处：《山东大学》2006年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的：研究脐血间充质干细胞(MSCs)的分离、体外培养、扩增以及碱性成纤维生长因子(bFGF)对脐血MSCs体外培养及诱导分化的影响，探讨脐血间充质干细胞向神经元样细胞分化的条件，为脐血MSCs临床应用治疗脊髓损伤提供技术储备和理论依据。 方法：用密度梯度离心法将脐血中单个核细胞(MNCs)从脐血中分离出来置于含20％胎牛血清(FBS)的H-DMEM培养液中，在37℃、5％CO2及饱和湿度培养箱中静置培养，72h后试验组加入bFGF，终浓度为10ng／ml，继续培养并传代，在倒置显微镜下追踪观察细胞生长情况和bFGF对脐血细胞诱导分化的影响；分别取体外培养后3d、7d后和13d的脐血MSCs，进行免疫组化法检测细胞表面标志物Nestin、MAP2和GFAP。光镜下随机取10个非重叠视野(×100)，计算nestin、MAP2和GFAP阳性细胞占总细胞数的比例，结果用均数±标准差(x±s)％表示。阴性对照用0.01mol／L的PBS代替nestin、MAP2和GFAP单抗。取扩增一代的脐血MSCs，用含20g／L牛血清白蛋白(BSA)的PBS洗涤后制成浓度为1.0×10~6／ml的单细胞悬液，，流式细胞仪检测脐血MSCs表面标志物。 结果：接种24h后悬浮细胞开始逐渐贴壁，培养后第3d，细胞形态呈圆形，卵圆形，纺锤或者逗号样(图a1)，nestin阳性细胞细胞可见(图b1)，占4.3±0.8％，MAP2和GFAP染色阴性。然后细胞数目逐渐增多，有突起逐渐伸出；培养7d后出现大量的贴壁细胞，以间充质细胞为主，同时有大量的破骨样细胞混杂，破骨样细胞胞体较大，多个核，圆形，此时贴壁MSCs细胞形态呈长梭形，单个核，有较长的突起，折光性强(图a2)，nestin、MAP2和GFAP阳性细胞阳性率分别为6.8％±0.6％、2.4％±0.6％和2.6％±0.8％；bFGF组与对照组相比，则细
[Abstract]:Objective : To study the effect of separation , culture , amplification and basic fibroblast growth factor ( bFGF ) on the proliferation and induction of cord blood MSCs in vitro . Methods : The mononuclear cells in cord blood were isolated from cord blood by density gradient centrifugation and cultured in H - DMEM culture medium containing 20 % fetal bovine serum ( FBS ) . After 72 h , the cells were cultured and passaged . Then , the cells were cultured and passaged at 37 鈩

本文编号：1357015