人羊膜上皮细胞的体外培养及标志分子的检测分析

发布时间：2018-01-02 17:40

  本文关键词：人羊膜上皮细胞的体外培养及标志分子的检测分析　出处：《细胞与分子免疫学杂志》2014年12期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的进行人羊膜上皮细胞(HAEC)的体外培养,观察其生物学特性,检测其分子特征。方法取剖宫产术后人羊膜,应用酶消化法获得HAEC,倒置显微镜下观察细胞生长变化;CCK-8法检测HAEC的生长曲线;Giemsa染色观察HAEC的克隆形成率;流式细胞术检测HAEC的细胞周期;取第2代HAEC,流式细胞术检测其CD29、CD31、CD44、CD59、CD105、CD117、CD133、HLA-DR的表达。免疫荧光法检测其CD9、上皮性钙黏素(E-cadherin)、足糖萼素样蛋白(PODXL)、阶段特异性胚胎表面抗原4(SSEA-4)、性别决定区Y相关因子2蛋白(SOX2)、SSEA-1、Nanog蛋白、八聚体结合蛋白3/4(Oct-3/4)的表达情况。结果酶消化法可以获得较纯的HAEC,细胞呈贴壁生长,呈多角形,核呈圆形。细胞在贴壁后第3天进入指数生长期。细胞周期分析显示66%处于G0/G1期,S期细胞占31.69%,G2/M期细胞占2.31%。HAEC的克隆形成率为(9.33±2.00)%。流式细胞仪检测显示HAEC阳性表达CD44、CD29、CD105、CD59,不表达CD31、CD117、CD133、HLA-DR。免疫荧光法检测显示HAEC表达胚胎干细胞相关分子CD9、E-cadherin、PODXL、SSEA-4、SOX2、SSEA-1、Nanog、Oct-3/4。结论HAEC可以在体外培养生长并在一定时期内保持其增殖活性;HAEC表达胚胎干细胞相关的表面标志分子。
[Abstract]:Objective to investigate the biological characteristics and molecular characteristics of human amniotic epithelial cells (HAECs) in vitro. Methods Human amniotic membrane was obtained after cesarean section and HAEC was obtained by enzyme digestion. Cell growth was observed under inverted microscope. The growth curve of HAEC was detected by CCK-8 method. The clone formation rate of HAEC was observed by Giemsa staining. The cell cycle of HAEC was detected by flow cytometry. The second passage HAECs were collected and the CD29 CD31, CD41, CD4, CD59, CD105, CD117 and CD133 were detected by flow cytometry. Expression of HLA-DR. CD9, E-cadherin, POD XLL were detected by immunofluorescence. The stage specific embryonic surface antigen (4) SSEA-4A and the sex-determining region Y related factor 2 protein (SOX2) were identified as SSEA-1 / Nanog protein. The expression of octamer binding protein 3 / 4 Oct-3 / 4). Results the purified HAECs could be obtained by enzyme digestion. The cells were adherent and polygonal. Cell cycle analysis showed that 66% cells were in G _ 0 / G _ 1 phase and S phase, 31.69% cells were in G _ 0 / G _ 1 phase. The colony formation rate of G2 / M phase cells was 9.33 卤2.00. HAEC positive expression of CD44-CD29 was detected by flow cytometry. CD105, CD59, CD31, CD117, CD137, HLA-DR.Immunofluorescence assay showed that HAEC expressed CD9, a molecule associated with embryonic stem cells. E-cadherin PODXLSEA-4SOX2 SSEA-1Nanog. Conclusion HAEC can grow in vitro and maintain its proliferative activity for a certain period of time. HAEC expresses surface marker molecules associated with embryonic stem cells.
【作者单位】： 暨南大学附属第一医院眼科;
【基金】：国家自然科学基金(30872808,81100637) 暨南大学第一临床医学院科研培育专项基金(20120710)
【分类号】：R329
【正文快照】： 羊膜是位于羊膜腔内的一层透明薄膜,无神经、血管、淋巴管。人羊膜上皮细胞(human amnioticepithelial cells,HAEC)位于羊膜的胎儿面。研究表明HAEC是受精后第8天从外胚层发育而来,具有部分胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)的特征。HAEC在不同生长因子和微环境的调节下,可

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本文编号：1370262