人脐血干细胞体外诱导分化为肝细胞样细胞的研究

发布时间：2018-01-03 22:04

本文关键词：人脐血干细胞体外诱导分化为肝细胞样细胞的研究　出处：《浙江大学》2006年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 脐血(Umbilical Cord Blood，UCB)中含有造血干／祖细胞(Hematopoietic Stem／Progenitor Cells，HSCs)，但与骨髓和成体外周干细胞有所不同。在过去的20年中，已经明确了脐血干细胞的存在与特性，脐血造血干／祖细胞的数量相当或超过了骨髓且大大高于成体外周血中的干细胞。与成体细胞相比，脐血造血干／祖细胞能在体外产生大量的集落，有不同生长因子存在时，能在体外培养基中长期扩增。脐血移植可治疗各种血液病，使造血重建且与常规治疗相比移植物抗宿主病(Graft Versus Host Disease，GVHD)发生率低。另外，脐血在基础研究和临床研究中存在的伦理问题较少，脐血的采集不会对新生儿造成危害，脐血干细胞可以冻存，复苏后不损伤干细胞的功能和活性，可以移植给受者。因此脐血可成为移植治疗血液病的更好的干细胞来源。目前的研究表明，无论是在体内还是体外，UCB还是移植治疗肝损伤的很好干细胞来源。在含生长因子组合的培养体系中，脐血干细胞能分化为肝细胞。在用细胞移植治疗肝损伤的模型中，人UCB细胞显示了分化为肝细胞的功能特性，，在肝损伤的SCID鼠外周血中能检测到释放的人白蛋白。本实验的目的是探索肝细胞生长因子(Hepatocyte Growth Factor，HGF)、干细胞生长因子(Stem Cell Factor，SCF)及白血病抑制因子(Leukemia Inhibitory　Factor，LIF)体外诱导人脐血造血干细胞分化为肝细胞的可行性，为肝组织工程提供新的种子细胞来源。本研究采用密度梯度离心法和免疫磁珠分选系统，获取人脐血CD34+造血干细胞进行体外诱导分化，分为诱导组：DMEM+HGF(10ng／ml)+SCF(10ng／ml)+LIF(10ng／ml)；阴性对照组：不加HGF、SCF、LIF三种因子。在培养第21天，用荧光倒置相差显微镜观察细胞形态；以逆转录聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)、免疫组织化学和免疫荧光分析检测白蛋白(Albumin，ALB)，人肝细胞型细胞角蛋白(Cytokeratin-18，CK18)和甲胎蛋白(Alpha—Fetoprotein，AFP)的基因和蛋白表达；用放射免疫分析法测定第7、14、21、23、25天细胞培养上清液中人ALB的含量。结果发现在诱导组中，HSCs出现明显的细胞形态、体积和数量变化，可见细胞变圆，多呈肝细胞样细胞。RT-PCR检测：诱导组第21天出现较强的白蛋白基因表达，AFP表达较弱，与正常肝细胞相似，阴性对照组，无表达。免疫荧光和免疫细胞化学分别检测ALB、人肝细胞型CK18：第21天ALB和人肝细胞型CK18呈阳性；阴性对照组，均未见表达。细胞培养上清液中ALB含量在第21天达到峰值，第21天后明显下降，与阴性对照相比差异有显著性。研究表明人脐血HSCs在一定的诱导条件下具有向肝细胞分化的潜能。
[Abstract]:The cord blood stem cells can be used to treat various kinds of blood diseases , and the umbilical cord blood stem cells can be stored in vitro . The present study shows that , whether in vivo or in vitro , ucb is a very good source of stem cell transplantation for the treatment of liver injury . In the growth factor - containing culture system , cord blood stem cells can differentiate into liver cells . In the model of cell transplantation for treating liver injury , the human ucb cells display the functional characteristics of differentiation into hepatocytes , and the released human albumin can be detected in the peripheral blood of SCID mice with liver injury . The purpose of this study was to explore the feasibility of differentiation of human umbilical cord blood hematopoietic stem cells into hepatocytes in vitro by exploring hepatocyte growth factor ( HGF ) , stem cell factor ( SCF ) and leukemia inhibitory factor ( LIF ) . The results showed that in the induction group , HSCs appeared obvious cell morphology , volume and quantity changes , and the cells became round and multi - hepatocyte - like cells . RT - PCR showed that the expression of albumin gene appeared in the 21 days of the induction group , and the expression of AFP was weak . There was no expression in the negative control group . There was no expression in the negative control group . There was no expression in the negative control group . The results showed that human umbilical cord blood HSCs had the potential to differentiate into hepatocytes under certain induction conditions .

【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R329

【参考文献】