绿荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞诱导分化成内皮细胞的研究

发布时间：2018-01-07 16:05

  本文关键词：绿荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞诱导分化成内皮细胞的研究　出处：《第三军医大学》2005年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：血管组织工程(vessel tissue engineering)研究的重点问题之一是种子细胞,种子细胞来源缺乏是组织工程中的一大难题。内皮细胞作为种子细胞在血管组织工程研究中具有重要作用,如何获取足量的内皮细胞是目前有待解决的问题。骨髓间充质干细胞因具有取材方便、对机体无害、自体移植不存在免疫排斥问题以及分化类型广泛等突出优势而有望成为血管组织工程中种子细胞的新来源。骨髓间充质干细胞的分化机制和诱导条件目前尚未阐明。多数观点认为,其与骨髓间充质干细胞所处的微环境密切相关,可能是微环境中所含的各种因子促成了骨髓间充质干细胞向该环境所需要的细胞或组织分化。已有研究表明高表达的内皮细胞生长因子和血流剪切力在骨髓间充质干细胞向内皮细胞的定向分化中均有显著作用,但如何采用合理有效的诱导方式有待于进一步的探讨。 目的 研究绿荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)体外分离培养及扩增能力,探讨其骨髓间充质干细胞在不同诱导条件和方式下向内皮细胞定向分化能力,为在体研究提供实验基础。 方法 (1)选用GFP小鼠作为研究对象,分离培养骨髓间充质干细胞,并在体外进行细胞的扩增和传代。(2)应用VEGF cDNA质粒转染和直接添加VEGF的方法对骨髓间充质干细胞进行诱导,并比较两者对GFP小鼠骨髓间充质干细胞分化为内皮细胞的作用,对其结果进行免疫荧光检测,计算阳性细胞比例,统计分析。选出高效的诱导方式。(3)分组诱导,实验分为3个实验组,即①切应力组:直接置于平行板流动腔内应用切应力(8dyn/cm~2)诱导24h;②转基因诱导静止组:将MSCs细胞行VEGF质粒转染诱导培养;③转基因诱导切应力组:将MSCs细胞行VEGF质粒转染诱导后置于平行板流动腔内在切应力条件下(8dyn/cm~2)诱导24h。之后再将各组细胞分别置于培养板培养1,3,5,7,10天,免疫荧光检测其分化效果。 结果 (1)MSCs每扩增一代,细胞数量增加4～8倍,7.0×10~3个原代MSCs体外扩增3代即获得1.4×10~8个细胞。连续传代10代后仍可保持旺盛的分裂能力,说明GFP小鼠MSCs具有良好的体外的培养扩增的能力。(2)直接添加浓度为25mg/l的VEGF
[Abstract]:Bone marrow mesenchymal stem cells are expected to be a new source of seed cells in vascular tissue engineering . The differentiation mechanism and inducing conditions of bone marrow mesenchymal stem cells are closely related to the microenvironment of bone marrow mesenchymal stem cells . Objective To investigate the in vitro isolation and amplification of green fluorescent protein ( GFP ) mouse bone marrow mesenchymal stem cells ( MSCs ) , and to explore the ability of bone marrow mesenchymal stem cells to directionally differentiate into endothelial cells under different induction conditions and modes . Methods ( 1 ) Using GFP mouse as the research object , the bone marrow mesenchymal stem cells were isolated and cultured , and the cells were amplified and passaged in vitro . Results ( 1 ) MSCs were amplified by 4 - 8 times and 7.0 脳 10 ~ 3 primary MSCs were amplified in vitro for 3 generations to obtain 1.4 脳 10 ~ 8 cells .

【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R329

【参考文献】

相关期刊论文 前4条

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2 郭晓东,杜靖远,郑启新,刘勇,段德宇,刘维钢;TGF-β_1基因转染间充质干细胞的量效关系及安全性研究[J];同济医科大学学报;2001年02期

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4 郭子宽,唐佩弦,刘晓丹,杨靖清,李秀森,陈小三,毛宁;人骨髓间充质干细胞支持体外造血(英文)[J];中国实验血液学杂志;2000年02期

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本文编号：1393251