戊肝病毒基因ORF2片段在大肠杆菌中的表达

发布时间：2018-01-08 10:09

  本文关键词：戊肝病毒基因ORF2片段在大肠杆菌中的表达　出处：《长春理工大学》2007年硕士论文　论文类型：学位论文

  更多相关文章： 戊肝病毒 基因 大肠杆菌

【摘要】：本实验主要研究戊肝抗原蛋白基因在大肠杆菌中优化表达的方法，，以期获得具有免疫原性的戊肝抗原蛋白，为戊肝基因工程疫苗的研究奠定基础。 首先采用氯化钙法将克隆有戊肝抗原蛋白基因的质粒载体pTO-T7-E转化导入大肠杆菌BL21(DE3)中。对经卡那霉素抗性筛选出的单克隆菌落扩增培养后，提取质粒，通过酶切和PCR法进行鉴定，确定转化菌。然后分别在25℃、30℃、37℃条件下对筛选出的转化菌培养，以1mmol／L IPTG诱导表达，超声裂解菌体，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测目的蛋白，蛋白印迹分析目的蛋白的免疫原性。 实验结果表明：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示：在37℃条件下经IPTG诱导的菌体中可见分子量约21KDa的重组蛋白，与理论值相符。表达产物主要以包涵体形式存在于胞内。蛋白印迹分析表明：该目的蛋白具有免疫原性。
[Abstract]:The aim of this study was to optimize the expression of hepatitis E antigen protein gene in E. coli in order to obtain the immunogenicity of hepatitis E antigen protein and lay a foundation for the study of hepatitis E gene engineering vaccine. Firstly, the plasmid vector pTO-T7-E containing hepatitis E antigen protein gene was transformed into Escherichia coli BL21 (DE3) by calcium chloride method. After amplification and culture of monoclonal colonies screened by kanamycin resistance. The plasmids were extracted and identified by enzyme digestion and PCR. The transformed bacteria were cultured at 25 鈩

本文编号：1396663