维生素A对树突状细胞的调节及其在粘膜免疫中的作用

发布时间：2018-01-08 10:15

本文关键词：维生素A对树突状细胞的调节及其在粘膜免疫中的作用　出处：《复旦大学》2006年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 目的和意义：一、通过体外培养研究全反式视黄酸对脐血树突状细胞的分化、成熟及功能的影响，并通过采用视黄酸受体α的特异性拮抗剂Ro 41-5253，探讨其作用的途径，，以期从抗原递呈细胞这一免疫应答的起始环节，进一步阐明维生素A增强儿童抗感染免疫力的机制。二、通过建立维生素A缺乏的动物模型，研究维生素A对粘膜树突状细胞的数量、分布、成熟分化、抗原识别和细胞因子产生等的影响，探讨维生素A调节粘膜免疫的作用及其分子机制，为临床正确使用维生素A营养防治疾病提供理论和实验依据。方法：一、共收集脐血18份，分离单核细胞后，在体外进行树突状细胞的诱导培养，分为：对照组、全反式视黄酸组(RA组)、RARα特异性拮抗剂组(RO组)、RA+RO组。采用流式细胞仪检测不成熟树突状细胞(CDla+HLA-DR+)和成熟树突状细胞(CD83+HLA-DR+)表面标记及HLA-DR荧光强度，观察RA或／和RO对树突状细胞分化、成熟的影响；通过混合淋巴反应，观察RA或／和RO对树突状细胞刺激T细胞增殖能力的作用；采用ELISA法和RT-荧光定量PCR法测定细胞因子，研究RA或／和RO在树突状细胞对Th细胞极向分化调节中的作用。二、建立维生素A缺乏的大鼠动物模型，应用免疫组化、RT—荧光定量PCR和ELISA的方法，观察维生素A缺乏对粘膜树突状细胞数目(OX-62阳性细胞数)、成熟度(CD80、CCR7的阳性面积)；抗原识别受体(TLR2和TLR4的阳性面积)和信号转导(MyD88的基因转录水平)、以及对细胞因子蛋白和基因转录水平的影响；并观察视黄酸受体的6种亚型在粘膜的表达情况。结果：体外培养结果显示，RA：1、延迟脐血单核细胞向树突状细胞的分化，并使其成熟明显受抑；2、抑制树突状细胞对异体T细胞增殖的作用；3、下调Th1细胞因子(IL-12、IFN-γ)，上调Th2细胞因子(IL-4、IL-10)；4、当RO与RA同时加入时则可完全逆转RA的上述作用。动物实验结果显示：维生素A缺乏，1、可增加气管和回肠末端粘膜树突状细胞的数目；2、增加气管粘膜TLR2表达，对TLR4的影响不明显，上调MyD88的mRNA水平，促进回肠集合淋巴小结中TLR2、TLR4的蛋白表达；3、增加回肠集合淋巴小结中CCR7的表达，但对气管粘膜细胞CD80和CCR7无明显影响；4、明显增加粘膜中IL-12的表达，对IFN-γ的影响却不明显(气管)或下降(肠道)，减少Th2细胞因子的产生，尤以气管明显(IL-4、IL-6均明显下降)，下调气管和肠道调节性细胞因子JL-10的蛋白表达；5、视黄酸受体的6个亚型在气管和肠道粘膜均有表达，维生素A缺乏主要下调RARα的蛋白和mRNA水平，而对其他5种受体亚型影响不明显。结论：1、视黄酸可抑制体外培养的脐血单核细胞向树突状细胞的分化和成熟，降低其刺激异体T淋巴细胞反应的能力，使免疫应答反应向Th2方向偏移，有利于抗体产生，从而增强体液免疫功能。2、RARα参与了视黄酸对脐血树突状细胞的调节作用。3、维生素A缺乏大鼠粘膜树突状细胞增多，成熟度增加，对病原体抗原的识别和递呈增加；4、维生素A缺乏大鼠气管粘膜Th2细胞因子的产生减少；肠道粘膜Th1细胞因子IFN-γ和调节性细胞因子IL-10的表达都下降，可能是其粘膜免疫功能降低的机制。5．视黄酸受体的6个亚型在气管和肠道粘膜均有不同水平的表达，维生素A缺乏主要下调RARα的表达。
[Abstract]:Objective : To study the effect of all - trans retinoic acid on the differentiation , maturation and function of dendritic cells in cord blood by in vitro culture , and to study the mechanism of vitamin A on the immune response of children by using the specific antagonist Ro 41 - 5253 of retinoic acid receptor 伪 . Methods : To observe the effects of RA and / or RO on the differentiation and maturation of dendritic cells , and to observe the effect of RA or / and RO on the differentiation and maturation of dendritic cells . The effects of RA or / and RO on the proliferation of dendritic cells were observed . The effects of RA or / and RO on the proliferation of dendritic cells were observed by ELISA and RT - fluorescence quantitative PCR . Results : The results showed that RA : 1 , delayed cord blood mononuclear cells differentiation into dendritic cells , and inhibited the proliferation of T cells . The results showed that the expression of IL - 12 , IL - 12 , IL - 6 , IL - 4 , IL - 10 were not significantly affected by the expression of IL - 4 and IL - 6 . Conclusion : 1 . Retinoic acid can inhibit the differentiation and maturation of dendritic cells from umbilical cord blood mononuclear cells cultured in vitro , and decrease its ability to stimulate allogeneic T lymphocyte reaction . 6 subtypes of retinoic acid receptor have different levels of expression in trachea and intestinal mucosa , and vitamin A deficiency mainly downregulates the expression of RAR伪.

【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R723;R392

【引证文献】