血管内皮细胞原代培养及CXCL16对其影响的实验研究

发布时间：2018-01-08 19:05

  本文关键词：血管内皮细胞原代培养及CXCL16对其影响的实验研究　出处：《昆明医学院》2006年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的：探讨建立一种简易、有效、重复性好的大鼠主动脉内皮细胞分离培养和体外扩增方法，及进行细胞鉴定、生物学特性分析，提供实验手段；研究探讨CXCL16对体外培养的鼠主动脉内皮细胞生长的影响。方法：1．大鼠主动脉“植块”培养法分离培养大鼠主动脉内皮细胞，采用偶联了PECAM抗体的顺磁玻珠对内皮细胞进行活性筛选、细胞纯化，并测定细胞生长率，绘制生长曲线；通过细胞形态学及内皮细胞第Ⅷ因子相关抗原免疫荧光法进行内皮细胞鉴定。2．取2～3代大鼠主动脉内皮细胞，接种密度为6×10~3细胞在96孔培养板上加入仅有1％FBS的M199培养液培养24h；然后每10孔(n=10)添加含不同浓度CXCL16(CXC chemokine ligand 16，CXC亚族第16号趋化因子)(OnM，0.01nM，0.1nM，1nM，10nM)孵育48h；及含10ng／mL碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor bFGF)孵育48h后用WST-1法进行细胞增殖的测定。结果：1．培养的大鼠主动脉内皮细胞(Rat aortic endothelial cells，RAECs)呈短梭形或多边形，呈鹅卵石镶嵌排列；ECs植入三维基质胶(Matrigel)并在血清或生长因子的刺激下可形成毛细血管样微管；免疫荧光法检测Ⅷ因子相关抗原在胞浆中呈颗粒荧光颗粒，即呈阳性反应。2．WST-1法检测CXCL16(OnM，，0.01nM，0.1nM，1nM，10nM)及含10ng／mL bFGF孵育48h后细胞的吸光率(absorbance)((?)±s)分别为：0.413±0.004、0.502±0.006、0.540±0.008、0.573±0.006、0.525±0.009、1.023±0.004。CXCL16 0.1～10nM各剂量组与空白对照组比较有显著差异(P＜0.05)，并在浓度为1nM时，所测定的吸光率达到最大值；10ng／ml的bFGF组与空白对照组比较明显升高(P＜0.01)。结论：1．成功建立了一种简易、有效、重复性好的鼠主动脉内皮细胞分离培养方法，为后续实验奠定基础。2．CXCL16具有促进ECs增殖的功能，它除了趋化因子外，还是一种血管新生因子。在RAECs的体外培养系统中，CXCL16能诱导ECs的增生。然而CXCL16诱导ECs增生的具体机制，及与感染性心内膜炎、风湿性心瓣膜病、动脉粥样硬化性心瓣膜病的关
[Abstract]:Objective : To study the effect of CXCL16 on the growth of rat aortic endothelial cells cultured in vitro by establishing a simple , effective and reproducible rat aortic endothelial cell separation culture and in vitro amplification method , and investigating the effect of CXCL16 on the growth of rat aortic endothelial cells cultured in vitro . Rat aortic endothelial cells were isolated and cultured in vitro . The endothelial cells were isolated and purified by paramagnetic beads coupled with PECAM antibody . The cell growth rate was measured and the growth curve was drawn . The endothelial cells were identified by cell morphology and endothelial cell factor 鈪

本文编号：1398301