丝氨酸蛋白酶介导隐球酵母细胞穿越血脑屏障机制及其对中枢神经系统作用的研究

发布时间：2018-01-15 00:27

  本文关键词：丝氨酸蛋白酶介导隐球酵母细胞穿越血脑屏障机制及其对中枢神经系统作用的研究　出处：《第二军医大学》2005年博士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：[背景] 新生隐球菌如何穿越血脑屏障并造成中枢神经系统感染的机制目前尚不清楚。研究发现丝氨酸蛋白酶可以提高血脑屏障开放程度,丝氨酸蛋白酶具有嗜神经性。有学者研究证实新生隐球菌可分泌丝氨酸蛋白酶。[目的] 证实新生隐球菌分泌的丝氨酸蛋白酶可以介导隐球酵母细胞穿越血脑屏障及其对中枢神经系统的作用。[方法] 运用构建的菌株芯片平台、免疫组织化学技术、蛋白琼脂廓清率晕环大小的测定、酶解物的凝胶分析、透射电镜技术、阿尔新蓝特殊病理染色和相差荧光显微镜等手段。[结果] 体外实验:绝大多数新生隐球菌菌株能产生特异性廓清率晕环;所有筛选的菌株细胞中都有丝氨酸蛋白酶表达;丝氨酸蛋白酶等干预因素使内皮细胞面积减少。体内实验:丝氨酸蛋白酶可以使伊文氏蓝荧光出现在有血脑屏障保护的脑组织区域;丝氨酸蛋白酶可以使穿越血脑屏障的菌量增多、穿越时间缩短。[结论] 发现新生隐球菌分泌具有活性的胞外蛋白水解酶并含有丝氨酸蛋白酶成分;新生隐球菌自身分泌的丝氨酸蛋白酶可以干扰构成血脑屏障主要成分内皮细胞的完整性使得血脑屏障开放程度提高;致病性真菌分泌的丝氨酸蛋白酶可能是一种毒性因子。
[Abstract]:[background] Cryptococcus neoformans to cross the blood-brain barrier and cause mechanism of CNS infection is unclear. The study found that the serine protease can improve the degree of opening the blood-brain barrier, serine protease has neurotropic nature. Some scholars that the c.neoformans secreted serine protease. To that the c.neoformans secreted serine protease mediated yeast Cryptococcus cells cross the blood-brain barrier and its effects on the central nervous system. Methods: using the constructed strain microarray, immunohistochemistry, determination of protein agar clearance halos size analysis, gel hydrolysates, transmission electron microscopy, alcian blue staining and microscope special pathology methods. Result] in vitro: most strains of Cryptococcus neoformans can produce specific clearance halos; all strains Cells have serine protease expression; serine protease intervention factors reduced endothelial cell area. In vivo: serine protease can make the Evans blue fluorescence in the brain regions have the protection of blood brain barrier; serine protease can make the bacteria cross the blood-brain barrier increased through time shortened. Conclusion] found Cryptococcus neoformans the secretion of extracellular proteinase and serine protease containing active ingredients; the integrity of the serine protease secreted by Cryptococcus neoformans can interfere with main components form the blood-brain barrier endothelial cells enhances the degree of BBB opening; secreted serine protease from pathogenic fungi may be a virulence factor.

【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R379

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本文编号：1426006