大鼠白细胞介素-6重组腺病毒构建及初步鉴定

发布时间：2018-01-15 03:14

  本文关键词：大鼠白细胞介素-6重组腺病毒构建及初步鉴定　出处：《免疫学杂志》2014年02期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的构建携带大鼠白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)基因的重组腺病毒,为研究IL-6在神经损伤中的生物学作用提供技术手段。方法体外扩增大鼠IL-6基因,定向克隆到pAdTrace-TOX腺病毒穿梭质粒中,构建重组pAdTrace-IL-6过表达腺病毒质粒,并与骨架质粒pAd-Easy-1在BJ5183菌中发生同源重组,获得pAd-IL-6腺病毒载体,经PacⅠ酶切后转染HEK293细胞进行包装扩增。通过Ad-IL-6腺病毒感染PC12细胞,Real-time PCR和Western blot检测PC12细胞中IL-6及STAT3的表达。结果 PCR电泳及酶切、测序鉴定均证实目的基因IL-6正确克隆至腺病毒载体中,所构建的腺病毒Ad-IL-6可感染PC12细胞,有效增加IL-6的表达水平,促进IL-6信号通路中关键蛋白磷酸化STAT3的表达。结论成功构建携带IL-6的重组腺病毒载体,该载体可显著增高PC12细胞中IL-6基因和蛋白表达水平,并上调IL-6相关信号通路。
[Abstract]:Objective to construct rat interleukin -6 (interleukin 6, IL-6) recombinant adenovirus, provide technical means for the biological role of IL-6 in nerve injury. Methods rat IL-6 gene amplification in vitro, cloned into Adenovirus Shuttle Plasmid pAdTrace-TOX, the recombinant adenovirus pAdTrace-IL-6 overexpression plasmid, and homologous recombination with the skeleton plasmid pAd-Easy-1 in BJ5183 bacteria, pAd-IL-6 adenovirus vector by Pac I enzyme digestion and transfected into HEK293 cells for packaging amplification. PC12 cells infected by Ad-IL-6 adenovirus, the expression of IL-6 and STAT3 Real-time PCR and Western PC12 cells to detect blot. Results of PCR electrophoresis and enzyme digestion and sequencing were the results showed that the target gene IL-6 cloned into adenovirus vector, adenovirus Ad-IL-6 constructed can infect PC12 cells, increase the expression level of IL-6, promote IL-6 signaling pathway The expression of STAT3 was phosphorylated by key proteins. Conclusion the recombinant adenovirus vector carrying IL-6 can be successfully constructed, which can significantly increase the IL-6 gene and protein expression level in PC12 cells, and up regulate IL-6 related signaling pathways.

【作者单位】： 重庆医科大学附属儿童医院营养研究中心
【基金】：国家自然科学基金项目(81271385) 重庆市卫生局重点项目(渝卫2009-1-41)
【分类号】：R392-33
【正文快照】： 白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)是一种由184个氨基酸组成的分泌型蛋白,广泛存在于人体内,T细胞、B细胞、胶质细胞、成纤维细胞、上皮细胞及部分肿瘤细胞等都可分泌IL-6[1-2]。中枢神经系统损伤过程中,IL-6参与脑内巨噬细胞、星形胶质细胞等的激活,产生免疫反应。研究发现,

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：1426531