大容量噬菌体抗体库的构建及鉴定

发布时间：2018-01-20 04:00

  本文关键词： 噬菌体抗体库 Loxp-cre重组系统 单链抗体　出处：《中华微生物学和免疫学杂志》2004年03期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的　构建大容量噬菌体单链抗体库 ,从中筛选人源单链抗体 (ScFv)。方法　从正常成人外周血和新生儿脐血分离淋巴细胞 ,用RT PCR扩增轻链可变区基因 (VL)和重链可变区基因(VH) ,通过重叠PCR法将VH 和VL 拼接形成ScFv基因 ,并克隆入噬菌体表达载体PDF ,得到ScFv初级噬菌体抗体库。以高MOI超感染cre+ 菌株BS136 5 ,通过loxp cre定位重组系统 ,介导轻重链的组合配对 ,得到大容量抗体库 ,用多种抗原对抗体库进行生物淘筛 ,鉴定抗体库的性能。结果　获得了 6×10 10 的大容量单链噬菌体抗体库。分别用卵清蛋白、胃蛋白酶、铁蛋白、人角蛋白、人TNF
[Abstract]:Objective to construct a large phage phage scFV library and screen human scFv.Methods lymphocytes were isolated from normal adult peripheral blood and umbilical cord blood of newborn. The light chain variable region gene (VLV) and the heavy chain variable region gene (VH) were amplified by RT PCR. VH and VL were spliced to form ScFv gene by overlapping PCR. The ScFv primary phage antibody library was cloned into the phage expression vector PDF, and the cre strain BS136 5 was superinfected with high MOI. Through the loxp cre localization recombination system, the combination pairing of light and light chains was mediated, and the large volume antibody library was obtained, and the antibody library was screened with a variety of antigens. Results A large volume single-chain phage antibody library of 6 脳 10 10 was obtained. Ovalbumin, pepsin, ferritin, human keratin and human TNF were used respectively.
【作者单位】： 解放军海军总医院 解放军海军总医院 解放军海军总医院 解放军海军总医院 解放军海军总医院
【基金】：解放军医药卫生“十五”重点项目资助课题 ( 0 1Z0 15 )
【分类号】：R392
【正文快照】： 目前 ,噬菌体抗体库技术成为人源单抗研制的重要途径 ,已经证实 ,从大容量抗体库可以不经免疫(by passingimmunization)获得任何特异性的人源单抗〔1〕,成为研制人源抗体的有效可靠手段。构建大容量抗体库的最大限制因素是细菌的转化效率较低 ,很难达到高容量的抗体库。反复

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 俞晓峰，王海涛，，黄策;人抗E．coliJ5噬菌体抗体制备的初步研究[J];生物化学与生物物理进展;1996年03期

2 万泽生,王海涛,姜绍谆;从构建的噬菌体抗体库中筛选抗甲肝人单抗[J];生物工程学报;1998年03期

3 王琰,王雅明,刘群英,徐建军,李全喜,陈宇萍,王力民,李竞;从噬菌体抗体库克隆抗人RBC单链抗体基因[J];中华微生物学和免疫学杂志;1998年01期

4 王琰,刘群英,化冰,高荣凯,陈宇萍,朱迎春;从人源性噬菌体抗体库分离出1株含有异常序列的抗HBsAg Fab克隆[J];中国免疫学杂志;1998年02期

5 王素莉,陈昆明,田恩江,陈祖培;抗甲状腺刺激性免疫球蛋白单链抗体噬菌体抗体库的初建[J];中国地方病防治杂志;1999年05期

6 王刚,化冰,王琰,刘玉峰;从半合成噬菌体抗体库筛选抗角蛋白人抗体[J];海军总医院学报;1999年04期

7 袁斌,何君,周育森,刘怀田,俞晓峰,王慧,黄策;从混合的噬菌体抗体库中直接筛选高亲和性的抗肿瘤坏死因子-α人源单克隆抗体[J];生物技术通讯;1999年04期

8 肖天利,刘为纹,房殿春;噬菌体抗体库的构建及抗AFP人单抗的筛选[J];第三军医大学学报;2000年07期

9 阎岩,白文涛,徐志凯,罗雯,张芳琳,吴兴安,刘勇,王海涛;重链可变区基因随机CDR3 ScFv噬菌体抗体库的构建及筛选[J];细胞与分子免疫学杂志;2000年02期

10 张建琼,张雪萍,谢维,林陵,单祥年,王琰;人源抗丙型肝炎病毒噬菌体抗体库的构建及筛选[J];细胞与分子免疫学杂志;2000年03期

相关会议论文 前10条

1 王志毅;刘杞;万泽生;张定凤;;从人源性噬菌体抗体库中筛选人抗HBsAg的Fab噬菌体抗体(摘要)[A];第九次全国中西医结合肝病学术会议论文集[C];2000年

2 王刚;刘玉峰;王琰;;人源性抗角蛋自抗体的基因克隆、表达及亲和力成熟[A];西部大开发 科教先行与可持续发展——中国科协2000年学术年会文集[C];2000年

3 朱建高;李跃辉;胡锦跃;李官成;周国华;李小玲;孙去病;;用EBV转化的大肠癌患者B细胞构建噬菌体抗体库[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年

4 王刚;王琰;化冰;刘玉峰;;基因工程抗角蛋白人抗体的制备与鉴定[A];2001年中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2001年

5 李承新;刘玉峰;李春英;万业宏;王刚;;基因工程技术制备人源性抗48kD角蛋白抗体Fab片段[A];2001年中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2001年

6 钟彦伟;成军;施双双;刘妍;夏小兵;王刚;陈菊梅;;丙型肝炎病毒包膜蛋白E2人源单链可变区抗体的筛选与鉴定[A];中华医学会第七次全国感染病学术会议论文汇编[C];2001年

7 刘德新;李小鹰;陈瑞晗;郝好杰;;Cu~(2+)金属螯合层析法纯化及复性人抗地高辛单链抗体[A];国际心脏研究会（ISHR）中国分会第七届学术会议暨中国病理生理学会心血管专业委员会第十届学术会议论文集[C];2002年

8 王刚;刘玉峰;;人天然抗体库的构建及抗角蛋白抗体的筛选[A];2002中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2002年

9 薛峰;郑捷;潘萌;李卫平;;鼠抗天疱疮抗原(PVA)单链抗体的构建与筛选[A];2002中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2002年

10 卢宁;王刚;刘玉峰;李巍;张海龙;赵小东;夏汝山;;基因工程抗角蛋白抗体在正常皮肤和几种表皮增生性皮肤病皮损中的反应定位[A];2003中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2003年

相关博士学位论文 前10条

1 王彦刚;人源性胶质瘤噬菌体抗体库的构建及初步筛选[D];第四军医大学;2002年

2 周丽君;CDR3导向抗体库技术人源化抗膀胱癌单抗BDI[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年

3 李金菊;血管内皮细胞的膜蛋白与乙酰胆碱靶标的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年

4 葛晓冬;脂多糖结合蛋白的分离、纯化及其噬菌体抗体筛选[D];第三军医大学;2003年

5 祝怀平;von Willebrand因子功能结构域研究及其A1区基因工程抗体制备[D];苏州大学;2003年

6 冀学斌;人源化抗血小板膜糖蛋白GPⅡ b/Ⅲa单链噬菌体抗体的研究[D];山东大学;2005年

7 刘晶;抗CD3改型单链抗体的分子定向进化[D];中国协和医科大学;2001年

8 朱进;抗Met基因工程抗体的亲和力成熟与特性研究[D];南京医科大学;2006年

9 吴兴安;人源性抗HFRS病毒抗体基因的获得及其真核表达载体的构建[D];第四军医大学;1999年

10 王刚;人源性抗角蛋白抗体的基因克隆、表达及亲和力成熟[D];第四军医大学;2000年

相关硕士学位论文 前10条

1 侯云霞;抗恶性疟原虫HRP-II单链抗体库的构建、筛选[D];第一军医大学;2001年

2 苏明;人源性天然单链抗体库的构建[D];第四军医大学;2002年

3 何小鹃;鼻咽癌人源抗独特型抗体的制备及筛选[D];中南大学;2003年

4 赵禹;人TRAb噬菌体抗体库的初建[D];天津医科大学;2003年

5 陈永锋;人源性噬菌体抗体库中抗CEA抗体的筛选与初步鉴定[D];第三军医大学;2002年

6 陈新华;抗细粒棘球蚴人工重组B抗原人源单链可变区抗体的筛选、鉴定和表达[D];新疆医科大学;2003年

7 秦琴;人源性抗乙型肝炎表面抗原（抗HBs）噬菌体单链抗体库的构建[D];山西医科大学;2003年

8 丁贵鹏;全人源抗MAGE-A1单链抗体的筛选及免疫活性鉴定[D];南京医科大学;2005年

9 乔媛媛;大容量噬菌体抗体库的构建及鉴定[D];中国人民解放军军医进修学院;2005年

10 段丽君;人TRAb单链组合文库的构建[D];天津医科大学;2005年

本文编号：1446760