桑色素对小鼠T细胞行为和DTH、脓毒症免疫调节作用的研究

发布时间：2018-01-27 03:55

本文关键词： 桑色素 T细胞活化增殖凋亡迟发型超敏反应巨噬细胞脓毒症一氧化氮　出处：《暨南大学》2007年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 目的：研究桑色素对T细胞行为和DNFB诱导的DTH、E. coli诱导的脓毒症模型的影响，并探讨其作用机制。方法：分别使用刀豆蛋白A(concanavalinA，ConA)和二丁酸佛波醇酯(phorbol 12，13-dibutyrate，PDB)加离子霉素(ionomycin，Ion)刺激小鼠淋巴结来源的T细胞活化和增殖，建立地塞米松诱导胸腺细胞凋亡模型。研究桑色素(morin)对上述刺激剂所诱导的T细胞行为的影响，以及对地塞米松诱导的胸腺细胞凋亡的影响。利用荧光标记抗体检测T细胞的表面分子，羧基荧光素二乙酸琥珀酰亚胺酯(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester，CFDA-SE)荧光染料检测T细胞增殖，碘化丙锭(propidium iodide，PI)检测T细胞周期，PI测定地塞米松(dexamethasone，Dex)诱导胸腺细胞凋亡的比率；建立二硝基氟苯(dinitrofluorobenzene，DNFB)诱导迟发型超敏反应(delayed type hypersensitivity，DTH)模型，观察morin对DTH模型小鼠耳组织肿胀、炎性细胞浸润程度和胸腺指数、脾指数的影响，光学显微镜下观察小鼠耳廓组织学变化，噻唑兰(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)法检测淋巴结细胞和脾脏淋巴细胞增殖情况；建立腹腔注射大肠杆菌(escherichia coli, E. coli)诱导脓毒症(sepsis)模型，观察7天内morin对小鼠存活率的影响，用Annexin-V／PI双染法检测淋巴细胞凋亡情况，Griess法检测脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞分泌一氧化氮(nitric oxide，NO)情况，荧光显微镜下观察和流式细胞术检测巨噬细胞吞噬情况。结果： 1．终浓度为25、50和100μmol／L的morin均下调ConA刺激后的CD69~+T细胞的比率，其中，100μmol／L的morin抑制作用最强，下调比率为(48.95±0.81)％，与对照组比较差异显著(P＜0.01)。CFDA-SE染色分析显示，各浓度的morin对ConA或PDB+Ion刺激48h或72 h的T细胞增殖，均具有明显地抑制作用，以100μmol／L morin抑制作用最明显。PI染色流式细胞术分析的结果表明，与ConA或PDB+Ion组相比，morin组中S期的细胞比率较高。PI染色分析小鼠胸腺细胞凋亡的结果表明，25μmol／L、50μmol／L 100μmol／L morin对Dex诱导的细胞凋亡有促进作用，100μmol／L morin作用最强，凋亡细胞比率为(42.10±3.06)％，与Dex组相比，差异显著(P＜0.01)。 2．双耳称重的结果显示，morin(70 mg／ml)处理组与DTH组具有显著的差异(P＜0.05)，能明显抑制DNFB引起的炎症反应；耳廓局部组织学检测也表明，morin能够抑制DNFB诱导的DTH，明显减少淋巴细胞的浸润。morin能降低DTH小鼠胸腺指数和脾脏指数，抑制淋巴结淋巴细胞(P＜0.01)和脾脏淋巴细胞的增殖(P＜0.05)。 3．morin(35 mg／ml)处理组sepsis小鼠长期存活率高于sepsis组(P＜0.01)；Griess反应检测NO含量的结果显示，各浓度组的morin均抑制LPS刺激巨噬细胞产生NO，100μmol／L的morin抑制作用最强(P＜0.01)；皮下注射morin 10 mg／ml，，发现其对小鼠巨噬细胞的吞噬功能也有促进作用(P＜0.05)，对淋巴细胞的凋亡影响轻微(P＞0.05)。结论： 1．morin可显著抑制ConA刺激的T细胞活化，对ConA或PDB+Ion诱导的T细胞增殖均有抑制作用；其对增殖的抑制作用主要表现为S期细胞的阻滞。对地塞米松诱导的胸腺细胞的凋亡有促进作用。提示morin可能是一种有效的免疫抑制剂。 2．morin可显著抑制DTH小鼠耳组织肿胀和淋巴细胞浸润程度，降低胸腺和脾脏指数，抑制淋巴细胞的增殖可能是其作用机制之一。 3．morin可延长sepsis小鼠的存活率，morin体内给药可增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力，并且morin可抑制LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞分泌的NO。这些结果均表明morin能有效地防止和治疗细菌性感染。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R392;R459.7

【参考文献】