含有CRISPR序列的噬菌体耐受菌的筛选
本文关键词： CRISPR系统 大肠埃希菌 噬菌体 噬菌体耐受 出处：《安徽医科大学学报》2014年06期 论文类型：期刊论文
【摘要】：人工设计合成规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)序列特异性引物,将从临床分离的大肠埃希菌株作为模板,采用PCR扩增方法筛选含有CRISPR系统的大肠埃希菌;利用噬菌斑法从医院未经消毒处理的污水中分离大肠埃希菌噬菌体,经过PEG沉淀的方法浓缩得到高滴度的噬菌体,再用该筛选噬菌体感染上述含有CRISPR的大肠埃希菌以筛选耐受该噬菌体的大肠埃希菌菌株。最后从70株大肠埃希菌中筛选到42株含有CRISPR序列的菌株,然后采用噬菌斑法分离到1株大肠埃希菌E.coli 147-30的裂解性噬菌体IME-EC1,在此基础上利用E.coli 147-30筛选到1株耐受噬菌体IME-EC1的大肠埃希菌菌株,命名为E.coli 147-30R1。
[Abstract]:A sequence specific primer was designed for the synthesis of clusters of short palindromes repeats (CRISPRs), using clinical isolates of Escherichia coli as a template. Escherichia coli containing CRISPR system was screened by PCR amplification. The bacteriophage of Escherichia coli was isolated from unsterilized sewage of hospital by plaque method. The phage with high titer was obtained by PEG precipitation. The screening phage was used to infect the Escherichia coli containing CRISPR to screen Escherichia coli strains tolerant to the phage. Finally, 42 strains containing CRISPR were screened out of 70 strains of Escherichia coli. A sequence of strains. A lytic phage IME-EC1 of E. coli 147-30 was isolated by plaque method. On this basis, a Escherichia coli strain resistant to phage IME-EC1 was screened by E.coli 147-30, named E. coli 147-30R1.
【作者单位】： 安徽医科大学;军事医学科学院微生物流行病研究所 病原微生物生物安全国家重点实验室;军事医学科学院附属医院临床检验科;
【基金】：国家高技术研究发展计划“863计划”(编号:2012AA022003) “艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项“十二五”实施计划(编号:2013ZX10004-605、2013ZX10004-217、2013ZX10004-607、2011ZX10004-001) “重大新药创制”科技重大专项“十二五”实施计划(编号:2011ZX09401-023) 国家自然科学基金(编号:81072350) 病原微生物生物安全国家重点实验室开放课题(编号:SKLPBS1113)
【分类号】：R378.21
【正文快照】： 规律成簇的间隔短回文重复(clustered regularlyinterspaced short palindromic repeats,CRISPR)是细菌内存在的专门针对噬菌体及质粒等外源基因的获得性免疫系统[1],这种抗性作用的发挥类似于真核生物中的RNA干扰作用。在噬菌体治疗过程中,细菌往往会对噬菌体产生耐受,导致耐
【参考文献】
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1 冷一非;赵述淼;朱辉;梁运祥;;嗜热链球菌抗噬菌体菌株的选育[J];中国酿造;2010年07期
【共引文献】
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【二级参考文献】
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，本文编号：1479183
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