幽门螺杆菌多表位重组原核表达工程菌的构建及表达特性研究

发布时间：2018-01-31 17:01

  本文关键词： 幽门螺杆菌 表位 尿素酶 粘附素 工程菌　出处：《四川大学学报(医学版)》2014年03期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的构建含有幽门螺杆菌尿素酶(UreI、UreB)及粘附素(HpaA)的多表位原核表达质粒pET28a(+)/ureI-ureB-hpaA〔pET28a(+)/IBA〕及相应的原核表达工程菌,研究其表达特性。方法通过生物信息学方法从ureI、ureB和hpaA基因中筛选T细胞和B细胞优势表位基因序列,人工合成并构建原核重组表达质粒pET28a(+)/IBA。经限制性内切酶(NdeⅠ,XhoⅠ)酶切鉴定及DNA测序鉴定后导入大肠杆菌BL21(DE3)。该工程菌经IPTG诱导后,用SDS-PAGE检测重组蛋白(rIBA)的表达情况,以抗幽门螺杆菌悉尼株(SS1株)特异卵黄抗体采用Western blot检测rIBA的抗原性。结果构建的多表位原核表达质粒pET28a(+)/IBA双酶切和测序鉴定与设计序列100%一致。工程菌经IPTG诱导后SDS-PAGE电泳显示在相对分子质量40×103左右有一条明显蛋白条带,Western blot显示有相应位置特异反应条带。结论成功构建幽门螺杆菌多表位重组原核表达质粒pET28a(+)/IBA及相应原核表达工程菌,该工程菌表达的rIBA具有抗原性,表明该重组蛋白与幽门螺杆菌有高度相关性。
[Abstract]:Objective to construct UreI containing Helicobacter pylori urease. Prokaryotic expression plasmid pET28a of UreB and HpaA. And the corresponding prokaryotic expression engineering bacteria. Methods T cell and B cell dominant epitope gene sequences were screened from ureIureB and hpaA genes by bioinformatics. The prokaryotic recombinant expression plasmid pET28a was synthesized and constructed. Xho 鈪，

本文编号：1479552