人骨髓间充质干细胞向胆碱能神经元样细胞定向分化的实验研究

发布时间：2018-02-26 02:09

  本文关键词： 骨髓间充质干细胞 神经元样细胞 胆碱能神经元样细胞 分化　出处：《南昌大学》2007年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 目的探讨人骨髓间充质干细胞(BMMSCs)的体外分离、纯化、扩增和向胆碱能神经元样细胞的定向分化潜能,以期为BMMSCs的神经移植提供理论依据。 方法应用密度梯度离心法体外分离出BMMSCs,在含10%FBS的DMEM/F12培养基(完全培养基)扩增和传代,用流式细胞仪检测BMMSCs的表面标志。利用扩增后的第二代BMMSCs进行诱导分化,分为实验组和对照组。实验组的细胞先用含40mg/L WHI-P131的完全培养基预处理48小时后,在含10ng/ml重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的完全培养基中预诱导24小时,最后以含1μmol/L全反式维甲酸(ATRA)和10ng/ml音速波状蛋白(Shh)的完全培养基诱导5小时;对照组不加任何诱导剂。诱导过程中在相差显微镜下观察细胞形态变化,然后进行神经元特异烯醇化酶(NSE)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和乙酰胆碱转移酶(ChAT)等神经细胞特异性标志的免疫细胞化学染色,并分别计算阳性细胞百分率。 结果分离扩增后的BMMSCs强表达CD29;较强表达CD44、CD166和CD105;不表达CD45、CD34和HLA-DR。实验组BMMSCs经诱导后均能分化为具有典型神经元形态的细胞,并表达NSE(61.00±3.63)%、GFAP(14.42±2.74)%;且相当部分神经元样细胞表达ChAT(9.92±1.29)%。对照组BMMSCs细胞形态无明显变化,且上述特异性标志物表达均为阴性。 结论BMMSCs可跨胚层分化为神经元样细胞和胆碱能神经元样细胞。
[Abstract]:Objective to investigate the potential of human bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSCs) in isolation, purification, expansion and differentiation potential to cholinergic neuron like cells in vitro, so as to provide a theoretical basis for BMMSCs neural transplantation.
Methods using density gradient centrifugation in vitro isolated BMMSCs culture medium containing 10%FBS DMEM/F12 (complete medium) amplification and passages, with the surface markers of BMMSCs by flow cytometry. The differentiation of the amplification of the second generation of BMMSCs, divided into experimental group and control group. The experimental group cells with 40mg/L WHI-P131 complete medium pretreatment after 48 hours in 10ng/ml containing recombinant human basic fibroblast growth factor (bFGF) in complete medium pre induced for 24 hours, finally with 1 mol/L of all trans retinoic acid (ATRA) and 10ng/ml protein (Shh) of the sonic wave induced by complete medium 5 h; the control group without any inducer. Induction of cell morphological changes were observed under phase contrast microscope and neuron specific enolase (NSE), glial fibrillary acidic protein (GFAP) and choline acetyltransferase (ChAT) nerve Immunocytochemical staining of cell specific markers, and the percentage of positive cells were calculated respectively.
The separation of amplified BMMSCs strong expression of CD29; strong expression of CD44, CD166 and CD105; the expression of CD45 CD34 and HLA-DR. BMMSCs in the experimental group after induction can differentiate into typical neuronal morphology of cells, and the expression of NSE (61 + 3.63)%, GFAP (14.42 + 2.74)%; and a considerable part of neurons the expression of ChAT like cells (9.92 + 1.29)%. The control group of BMMSCs cells had no significant morphological changes, and the specific markers were negative.
Conclusion BMMSCs can differentiate into neuron like and cholinergic neuron like cells.

【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R329

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