脑、肺基质细胞诱导调节性巨噬细胞发育研究方法学的建立

发布时间：2018-03-03 06:07

  本文选题：基质微环境　切入点：巨噬细胞　出处：《泰山医学院》2007年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：20世纪80年代,许多的研究者在研究李斯特菌感染以及利士曼原虫感染时,发现了具有免疫抑制活性的巨噬细胞,这表明体内在某些状态下天然存在着一群具有免疫抑制活性的巨噬细胞。2004年,Zhang等提出了脾脏的基质细胞能够促进树突状细胞再分化为一群与巨噬细胞生物学特性类似的具有明显免疫抑制活性的调节性树突状细胞。这提示了调节性树突状细胞和调节性巨噬细胞可能共同来源于基质细胞的诱导作用。 最近有报道,在肺、脑和肝中存在调节性树突状细胞。这些研究促使我们将这些非免疫器官和调节性巨噬细胞联系在一起,并据此推测这些非免疫器官内的固有巨噬细胞除了吞噬功能和抗原提呈功能外,还发挥了免疫抑制功能。 为了验证我们的假设,我们采用全身灌注的方法去除脏器毛细血管内的血细胞,以清除血中单核细胞的干扰。在灌注50ml培养基后,多数脏器包括脑、肝、肺,其色泽较未灌注脏器明显变浅,再经过Ⅲ型或Ⅳ型胶原酶消化,CD11b抗体磁珠富集以获得较纯的巨噬细胞。 我们采用组织块培养技术,培养新生小鼠非免疫器官的基质细胞,并将培养的肺和脑组织成功建系。并且将板式酶标仪与核酸荧光标记相结合,建立了新的细胞增殖检测方法,应用本研究中。 将腹腔巨噬细胞接种于培养的基质细胞之上,诱导10～14天后,CD11b抗体磁珠富集诱导后的巨噬细胞,测定其对DO11.10 OVA TCR转基因小鼠CD4+T细胞的抑制作用。从结果分析,肺基质细胞诱导的巨噬细胞具有明显的抑制活性,相比之下,脑基质细胞诱导的巨噬细胞其抑制作用并不明显。 本研究中,我们利用了全身灌注的小鼠模型,建立了体外培养非免疫器官基质细胞的方法,建立了利用板式酶标仪和核酸荧光标记测定细胞增殖的方法,证实了肺和脑的基质细胞能够诱导巨噬细胞产生免疫抑制活性。
[Abstract]:In 1980s, many researchers found macrophages with immunosuppressive activity when they studied Listeria infection and Leismania infection. In 2004, Zhang et al proposed that splenic stromal cells can promote the differentiation of dendritic cells into a colony and the biological characteristics of macrophages. Similar regulatory dendritic cells with obvious immunosuppressive activity suggest that both regulatory dendritic cells and regulatory macrophages may be derived from the induction of stromal cells. Recent reports of regulatory dendritic cells in the lungs, brain and liver have prompted us to associate these non-immune organs with regulatory macrophages. In addition to phagocytosis and antigen presentation, the intrinsic macrophages in these non-immune organs also play an immunosuppressive role. To test our hypothesis, we used systemic perfusion to remove blood cells from the visceral capillaries in order to remove the interference of monocytes in the blood. After 50 ml culture, most organs included brain, liver, lung. The color of CD11b antibody was obviously shallower than that of non-perfused viscera, and then digested with type 鈪，

本文编号：1559827