幽门螺杆菌CagA蛋白与微囊藻毒素对胃肠道上皮细胞作用的蛋白质组学研究

发布时间：2018-03-04 16:10

  本文选题：幽门　切入点：杆菌　出处：《浙江大学》2006年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：研究背景 流行病学资料表明,幽门螺杆菌(Hp)细胞毒素相关蛋白A(cytotoxin-associated protein A,CagA)与慢性活动性胃炎、消化性溃疡和胃癌的发生密切相关。CagA蛋白由Hp疾病相关基因“cag致病岛”编码并通过特有的Ⅳ型分泌途径进入宿主细胞,其C端谷氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-酪氨酸-丙氨酸(EPIYA)基序中酪氨酸位点的磷酸化对其生物学功能的发挥至关重要。以往的研究已发现,磷酸化的CagA通过与SHP-2结合,强烈干扰宿主细胞信号转导通路,激活转录因子NF-κ B和AP-1,激活原癌基因c-fos和c-jun,导致细胞的增殖与分化。CagA与SHP-2的相互作用还会导致宿主肌动蛋白细胞骨架重构,使细胞的运动性和迁移能力增强。然而,CagA的致病机制至今仍不完全明确。从蛋白质组角度整体性地研究CagA对宿主细胞的影响,将有助于对其致病机制的全面认识。表面增强的激光解析离子化-飞行时间-质谱(surface-enhanced laser desorption/inionation-time of flight-mass spectra,SELDI-TOF-MS)技术可用于建立细胞特异的蛋白质表达谱,分析不同生理或病理状态下蛋白质组的差异。相对于双向电泳等传统技术,SELDI技术具有操作简单上样量少,高通量、高灵敏度、在低分子量范围具有更好的分辨能力等优势,是分析细胞蛋白质组的有力工具,已在肿瘤标志物的筛选和肿瘤的早期检测中发挥了重要作用,在疾病机理研究领域也具有很好的应用前景。本研究采用SELDI技术研究CagA对胃上皮AGS细胞蛋白质表达的影响,从而确定与CagA致病过程有关的小分子宿主细胞蛋白质,并分析蛋白质表达差异与CagA磷酸化的相关性以及与CagA激活Erk/MAPK信号转导通路的相关性。 方法 为研究CagA对AGS细胞蛋白质表达的影响,我们用野生型cagA质粒、磷酸化位点突变型cagA质粒和空载体质粒瞬时转染AGS细胞,EGFP质粒作为监控转染效率的对照。RT-PCR和测序验证野生型及突变型cagA基因在对应组中的表达。用SELDI蛋白质芯片系统分别对各组细胞蛋白进行结合与分析,得到各组特异的
[Abstract]:Research background. Epidemiological data showed that cytotoxin associated protein Acytotoxin-associated protein CagA and chronic active gastritis were associated with Helicobacter pylori. Peptic ulcer is closely related to gastric carcinogenesis. CagA protein is encoded by the HP disease-related gene "cag pathogenicity island" and enters host cells through a unique type 鈪，

本文编号：1566363