疟原虫裂殖子顶端膜抗原1（AMA-1）免疫保护功能域的分析

发布时间：2018-03-06 06:04

  本文选题：疟原虫　切入点：裂殖子顶端膜抗原　出处：《第二军医大学》2005年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：疟疾目前仍然是严重威胁人类健康的热带传染病。由于疟原虫抗药性以及蚊媒抗杀虫剂的抗性产生并广泛传播,使传统的疟疾防治方法面临严重困难。研制有效的疟疾疫苗被认为是疟疾防治的重要途径。 疟原虫(Plasmodium)裂殖子顶端膜抗原1(apical membrane antigen 1,AMA-1)是一个重要的疟疾疫苗候选抗原,它存在于所有已经验证的疟原虫种中,虽然对AMA-1的功能尚不清楚,但目前认为该蛋白在疟原虫入侵宿主细胞的过程中发挥重要作用,对疟原虫生长可能起着必不可少的作用。AMA-1的分子结构在种间相当保守,其胞外区含有16个半胱氨酸,形成以二硫键结构为基础的稳定的天然构象,根据二硫键的位置关系推测,可分为3个二硫键依赖的区域(Domain Ⅰ、Domain Ⅱ和DomainⅢ),分别含有3对、2对和3对二硫键。 以往研究表明AMA-1具有良好的免疫原性和保护性,但是对该分子中的保护性免疫功能域尚缺乏明确的分析和鉴定。本研究以伯氏疟原虫(Plasmodium berghei,Pb)AMA-1作为研究对象,利用伯氏疟原虫小鼠动物模型进行PbAMA-1分子保护性免疫功能区域的鉴定,其结果可以指导含AMA-1区域或表位的疫苗的构建。 首先,我们对我室保存的伯氏疟原虫虫株的AMA-1基因进行了测序。在PbAMA-1基因内部设计两对引物,用PCR法扩增得到两个片段,其长度分别为1100bp和900bp,两个片段约有200bp的重叠区,对两个片段进行全序列测序,获得完整的PbAMA-1胞外区的基因序列。依据测序所得的PbAMA-1 DNA序列,推导其氨基酸序列。根据文献报道和二硫键的位置,将PbAMA-1胞外区分为三个彼此之间重叠的基因片段,分别命名为DⅠ、DⅡ和DⅢ。在三个片段的重叠区利用同义密码子替换引入Cla I和Pac I两个限制性内切酶识别位点,用于基因片段间的拼接。采用毕氏酵母密码子使用频率重新设计DⅠ、DⅡ和DⅢ的核苷酸序列。在该基因中发现7个潜在的糖基化位点(Asn-X-Ser/Thr),通过Asn→Gln氨基酸突变消除这些糖基化位点。为便于该蛋白的纯化,在基因的3’端添加6个编码组氨酸的序列(6×His tag)。序列优化后PbAMA-1基因的A+T的含量由原来的69.6%降到了63.0%。
[Abstract]:Malaria continues to be a tropical infectious disease that poses a serious threat to human health. As a result of the resistance of malaria parasites and mosquito vectors to insecticides, The development of effective malaria vaccine is considered to be an important approach to malaria control. Plasmodium) the apical membrane antigen 1 AMA-1) is an important vaccine candidate antigen for malaria, which is present in all confirmed Plasmodium species, although the function of AMA-1 is unclear. However, it is believed that this protein plays an important role in the invasion of host cells by Plasmodium, and may play an essential role in the growth of Plasmodium. AMA-1 is quite conserved in species, and its extracellular domain contains 16 cysteine. A stable natural conformation based on the disulfide bond structure is formed. According to the position relationship of the disulfide bond, it can be divided into three disulfide bond dependent domains: domain 鈪，

本文编号：1573608