人血液成分及其衍生物的比较蛋白质组学研究
发布时间：2018-03-21 15:57
本文选题：蛋白质组 切入点：双向电泳 出处：《中国药品生物制品检定所》2006年硕士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：随着人类基因组研究计划的完成，生命科学的研究开始进入后基因组时代。目前，蛋白质组学的研究已经成为21世纪生命科学研究的热点领域之一。本文通过构建以双向电泳(2-DE)相关方法为基础的血浆蛋白质组研究体系，针对人血液成分及其衍生物包括血浆、血清、红细胞和人血白蛋白等不同样本，采用比较蛋白质组学的基本技术路线，进行了蛋白质组学的研究。 以正常人血浆样本，建立和优化了血浆蛋白质的2-DE实验方法与信息处理方法，包括：(1)通过对双胺银染法和酸性银染法检测灵敏度的比较，确定了以酸性银染法作为观察电泳结果的基本方法，其灵敏度可达2ng，且胶板背景低于双胺银染法；(2)通过对等电聚焦过程电泳参数的调整和优化，提高了2-DE图谱的清晰度和稳定性；(3)通过比较Albumin and lgG removal Kit对血浆样本2-DE图谱的影响，发现该试剂盒虽然对于白蛋白和球蛋白等高丰度蛋白具有显著的去除作用，但同时对低丰度蛋白也存在非特异去除作用；(4)通过不同pH范围的IPG胶条对血浆蛋白2-DE分离效果的比较，确定以窄pH胶条(pH4-7)分离血浆蛋白组分的效果明显优于宽pH胶条(pH3-10)；(5)确定了以软件自动找点功能与灰度分析相结合的差异蛋白斑点的基本比较方法。 以SDS-PAGE和2-DE方法，，分别对正常人血浆样本、国产人血白蛋白样品和国产重组人白蛋白样品进行电泳分离，采用胶体考染和银染显示电泳结果，以Labworks4.5软件分析图谱，比较了人血白蛋白(人血浆蛋白衍生物)的纯度差异。结果显示：(1)人血白蛋白样品的SDS-PAGE和2-DE电泳纯度低于现行方法的结果；(2)重组人白蛋白样品含有明显的宿主细胞蛋白。提示，SDS-PAGE和2-DE可以提高血液制品纯度分析的灵敏度。 以2-DE方法比较了不同中和抗体效价的SARS康复患者血浆样本(试验组)与正常人单采血浆样本(对照组)蛋白谱的异同。结果显示：(1)对照组样本的2-DE图谱出现蛋白斑点320±20个，试验组样本出现蛋白斑点332±37个，二者主要斑点的位置与数量基本一致；(2)对照组中少量蛋白斑点的出现频度不同；(3)试验组有6个蛋白点群与对照组出现差异，并在相同区域Ⅲ内有3个蛋白斑点的灰度值出现变化，且灰度值变化与样本的中和抗体效价值呈正相关性。以Capillary -LC／Q-TOF-ULTIMA进行差异蛋白斑点的质谱分析的结果显示：灰度值出现下调的蛋白斑点为补体C3片段(Spot8)和结合珠蛋白前体(Spot9)，二者均为急性反应蛋白。 以2-DE方法比较了EGFR外显子19缺失突变的肺癌患者血清样本(试验组)与正常人血清样本(对照组)蛋白谱的异同。结果显示：(1)对照组样本的2-DE图谱
[Abstract]:With the accomplishment of human genome project, life science research began to enter the post genome era. At present, proteomics research has become a hot research field of life sciences in twenty-first Century. This paper constructs by two-dimensional electrophoresis (2-DE) method based on plasma proteome research system for human blood components and plasma derivatives, serum, erythrocyte and Human Albumin different samples, using the basic technical route of comparative proteomics, the proteomics research.
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本文编号：1644548
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